2010基因重组［PPT课件］.ppt

DNA重组与基因工程
广州医学院实验医学研究中心
重组DNA技术(基因工程)
(binant DNA technique),在体外通过末端共价连接重新组合脱氧核糖核酸(DNA)分子,使它们能在适当的细胞中增殖的遗传操作。这种操作可把特定的基因组合到载体上,并使之在受体细胞中增殖和表达。
遗传工程(ic engineering )就是按人们的意思去改造生物的遗传特性、或创建具有新遗传物性的生物。
遗传工程广义包括细胞水平上的遗传操作(细胞工程)和分子水平上的操作,即重组DNA技术(有人称之为基因工程)
基因工程中最主要的工作是分子克隆(molecular cloning )
分子克隆所谓克隆,是指一个细胞经过无性繁殖以后所形成的子代群体。纯化繁殖DNA就称为DNA克隆(分子克隆)
分子克隆—制备DN***段,在体外将目的基因与载体DNA结合成一个具有自我复制能力的DNA分子(复制子、重组体),继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增、获得大量同一DNA分子拷贝。
分子克隆所采用的技术:重组DNA技术
重组DNA技术←→分子克隆技术
重组DNA技术一般包括四步:
①产生DN***段(目的基因的获得);
②DN***段与载体DNA分子相连接;
③将重组DNA分子导入宿主细胞;
④选出含有所需要的重组体DNA分子的宿主细胞。
一、目的基因序列的来源
构建基因组DNA文库
构建cDNA文库
PCR扩增
化学人工合成
(一)、构建基因组DNA文库
用物理方法或酶法将基因组DNA降解成预期大小的片段,然后与载体(噬菌体、粘粒或YAC载体)连接,转入受体细菌或细胞。每一个细胞接受了一个重组DNA分子,许多细胞一起组成一个含有基因组各DN***段克隆的集合体,就称为基因组DNA文库(genomic DNA library)。