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黄连解毒汤对ApoE- -小鼠动脉粥样硬化炎症及主动脉斑块稳定性作用的机制研究.pdf


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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。万方数据黄连解毒汤对/小鼠动脉粥样硬化炎症及主动脉斑块稳定性作用的机制研究一小杨秀君强‘,张军餍』’动脉粥样硬化融且恢致性、渐进性血管病变,以其为主要病理基础导致的心脑血管疾病,全球发病率和死亡率呈明显上升趋势,发病态势正逐渐向年轻化方向转变!⑸展的过程是以脂质代谢障碍为基础病变,多种炎症因子参与其中,最终促使动脉血管内膜斑块形成,甚至斑块破裂,导致多种急性心脑血管疾病的发生因此,调脂抗炎是治疗的重要环节。他汀类药物是目前防治的一线药物,但部分应用他汀类药物治疗的患者发生了肝毒性、肌溶解等不良反应。目前,无论是实验研究还是临床研究,都已经广泛认可了中医药在防治方面的功效,且相对安全琛V幸饺衔#咧骋咨H龋咧同时也是导致的重要危险因素之一,因此,湿热证与关系密切。黄连解毒汤是清热燥湿解毒的经典方剂¨。。既往多项研究∽。。表明,黄连解毒汤能够有效达到降脂、抗炎等多种治疗效果,其干预作用不仅可改善小鼠的脂质代谢,还可影响干扰素—,等多种炎症因子的表达。本研究旨在观察黄连解毒汤对鼠血脂、血清炎症因子紫赴樗豯一紫赴樗匾一琁R⒅琢坏死因子旺细胞介素,。水平,主动脉内膜斑块不稳定指数响,进一步分析炎症因子水平和脂质代谢与斑块稳定性的关系。琁旺,和白琕的影甤..安徽中医药大学研究生院,安徽合肥;不罩幸揭┐笱У谝桓绞粢皆海不蘸戏不帐≈幸揭┛蒲г盒难9懿⊙,探讨黄连解毒汤治疗主动脉斑块稳定性的作用机制。方法将只小鼠随机分为空白组,模型组,黄连解毒汤低、中、高剂量组,阿托伐他汀组,每组弧DP妥榧案┳锳恍∈蟾韪咧彻菇ㄖ鞫鲋嘌不P周后,黄连解毒汤低、中、高剂量组小鼠分别按、、·剂量给予黄连解毒汤;阿托伐他汀组小鼠按/剂量给予阿托伐他汀;空白组、模型组给予等量的蒸馏水。每日灌胃危周。第苣┎杉瓯荆捎盟漳精伊红染色观察各组小鼠主动脉内膜的组织形态;半自动生化分析仪检测各组小鼠血清总胆固醇琓、三酰甘油琓、低密度脂蛋白胆固醇猚,籆案呙度脂蛋白胆固醇琀。水平;采用。?觳飧髯榘紫赴樗豯,.、白细胞介素琁⒅琢龌邓酪蜃觗、白细胞介素浚蛔橹厥獠±砣旧?际醪舛ò呖槟诰奘上赴俊ⅰ捌交〖《鞍“细胞含量、斑块内胶原纤维含量及斑块内脂质含量,从而计算斑块不稳定指数琕。结果黄连解毒汤能明显改善小鼠主动脉管壁的病理变化。与空白组比较,模型组小鼠血清、、;。、。;⒏呒亮组小鼠血清、、。较灾仙;.、。;各给药组小鼠主动脉内膜斑块均显著减少。黄连解毒汤高剂量组改善上述指标的效果与阿托伐他汀组相当.=崧黄连解毒汤对动脉粥样硬化∈笾鞫鲅9苣谘字⒎从鞍呖槲榷ㄐ跃哂幸欢ǖ母纳谱饔茫页始亮恳览敌裕浠瓶赡苡降低血脂水平、缓解炎症损伤有关。丶蔧黄连解毒汤;动脉粥样硬化;血脂;炎症因子;斑块不稳定指数型挤掷嗪臸../甶基金项目:安徽省自然科学基金青年项目;安徽省中医药领军人才项目幸揭┓⒄姑作者简介:杨秀君,女,硕士研究生通信作者:戴小华,男,教授,主任医帅,,琣万方数据一小鼠,随机分为空白组,模型组,黄连只周龄健康雄性∈骩北京唯尚立拓科技有限公司,生产许可证号:逯柿课.,购买后于安徽中医药大学动物实验中心饲养,每笼唬杂山臣耙茄璞秆细裎蘧操作后使用,置于清洁饲养环境级,室温为,相对湿度为%,猓笛穄中饲养。本实验经安徽中医药大学实验动物伦理委员会批准,伦理编号为。药物黄连解毒汤槌桑夯栖恕⒒瓢馗连、栀子各饮片:购自安徽中医药大学第一附属医院中药房;阿托伐他汀臙:辉瑞制药有限公司。总胆固醇琓测定试剂盒鹾臕、三酰甘油琓测定试剂盒鹾臕、低密度脂蛋白胆固醇琁。。测定试剂盒鹾臕、高密度脂蛋白琀。测定试剂盒鹾撼ご夯懔ι铮籌约梁货号、鶨试剂盒鹾:武汉基因美科技;交〖《鞍鶶固批号:北京荆籆固批号河⒐鶤公司。仪器酶标仪荷钲诶锥派蒲股份有限公司;半自动生化分析仪长春汇力生物技术有限公司;徕卡切片机:上海徕卡仪器有限公司;显微镜:上海普赫光电科技有限公司。动物分组及模型复制采用高脂饮食构建。小鼠模型【”。取只芰浣】敌坌解毒汤低、中、高剂量组,阿托伐他汀组孔只;空白组皇贾瘴故称胀ㄋ橇希P妥榧案┳榫食高脂饲料戏是嘣瓷锟萍加邢薰旧蛔槌桑サü檀肌ブ碛汀%白糖、%基础饲料5周末随机选取恍∈螅∥簿猜鲅=醒G逖е副检测,若与空白组比较,血清、、较灾上升,珻水平显著下降,即为模型制备成功。后芗绦柘嘤λ橇衔寡堋自第苣┙幸┪锕辔父稍ぁ将黄连解毒汤中药材依照原方比例加水煮沸,合并渭逡海阄‘ㄋ踔瞥伤寮粒生药,放冰箱冻存,使用时以蒸馏水以壤释。根据人和动物体表面积折算系数进行换算给予相应临床给药剂量,黄连解毒汤低、中、高剂量组小鼠分别按、、·剂量给予黄连解毒汤;阿托伐他汀组小鼠按托伐他汀;空白组、模型组给予等量蒸馏水。每日灌胃危周。标本采集第周末┪镏瘟周后的最后采集标本。实验小鼠禁水禁食%戊/进行腹腔注射麻醉,摘取小鼠眼球,采集血液,样本静置螅胄,,收集上清,一’4娲狻=鼠胸腹腔打开,摘取主动脉,清理干净后,裁取数段,分别放置在透射电子显微镜固定液、ザ嗑奂兹┤液及液氮罐中,保存待测。观察指标及方法.∈笾鞫瞿谀さ牟±斫峁贡浠取小鼠左右,放置在%甲醛溶液的管中固定,梯度乙醇脱水,二甲苯使组织透明化,石蜡包埋,随后切片,蒸馏水洗,每组随机选取沤兴木精伊红微镜观察小鼠主动脉的组织形态。.∈笱V郊把字⒁蜃蛹觳取血清适量,使用半自动生化分析仪检测各组小鼠血清、、瓹及瓹水平;采用。?觳飧剑笛椴街柩细依照相应试剂盒说明书进行。.∈笾鞫瞿谀ぐ呖閂觳学特殊病理染色技术测定主动脉内膜斑块内巨噬细赴俊呖槟诮涸宋考斑块内脂质含量,从而计算斑块:奘上赴含量/%屎浚/涸宋浚平滑肌细胞含量/%,各组计量资料数据采用“均数±标准差荨纒北硎尽6嘧榫冉喜捎玫ヒ蛩胤差分析。硎静钜煊型臣蒲б庖濉各组小鼠主动脉内膜的组织形态比较空白组小鼠主动脉管壁结构清晰,形态正常。与空白组比较,模型组小鼠主动脉管壁明显增厚,内膜下有大量泡沫细胞堆积、斑块形成,少量纤维在斑块表层沉积,材料动物胆固醇、一、方法药物干预痬·剂量给予阿巴比妥钠痳主动脉琀染色,光学显组。、.及利用组织胞含量、结果://...万方数据部分动脉管壁变薄且轻度膨出。与模型组比较,黄连解毒汤中剂量组小鼠动脉管壁情况有所改善,主动脉内膜下少量泡沫细胞聚集,脂质斑块变小。黄连解毒汤高剂量组与阿托伐他汀组小鼠动脉内膜组织病理变化改善则更加明显,主动脉管壁结构清晰,趋于正常,其中黄连解毒汤高剂量组疗效最佳。见图各组小鼠血脂水平比较与空白组比较,模型组小鼠、、狢水平均显著上升,,黄连解毒汤中、高剂量组小鼠、、。⑼蟹ニ∽楸冉希屏舛咎高剂量组小鼠、、R籆、,模型组小鼠血清一一“;与模型组比较,黄连解毒汤中、高剂量组小鼠,、灾跎,,⑼蟹ニ∽,黄连解毒汤高剂量组小鼠血清,、差异无统计学意义.<。各组小鼠主动脉内膜斑块比较组比较,┳樾∈⑼蟹ニ∽比较,黄连解毒汤低、,对于预防是以巨噬细胞中脂质异常代谢堆积并伴发斑块破裂、血栓形成都具有重要的意义。炎症为特征的动脉内膜慢性病变,是多种心血管疾研究””⑾郑珹牟±肀浠云⑵槲V鳎病的主要发病原因¨。发生发展过程中,血合并瘀、毒、痰三者的相互作用。气郁化火,内蕴热脂状况及多种炎症细胞因子均具有重要作用,它们毒,灼伤脉络,脉损血瘀,阻塞脉管,热毒血瘀脉阻为共同参与了斑块的形成。而动脉内膜斑块由稳心血管疾病的主要病机,故认为热毒蕴结是的定转变为不稳定,乃至破裂,或突发血栓、出血,则是关键病机,可用清热泻火解毒法对进行治疗。急性心脑血管事件发生的重要原因之一“。目前对黄连解毒汤源自唐代王焘《外台秘要》,全方主要由斑块不稳定的机制研究成果欠佳,因此,研究斑块不稳黄连、黄柏、黄芩、栀子兑┳槌桑嗪闭郏迦解毒汤巾剂量组;;箭与空白组汤低、中剂量组小鼠,凇、与空白见表讨论://.:;、泡沫细胞及炎症细胞浸润图各组小鼠主动脉内膜组织形态比较旧ǎ表各组小鼠血脂水平比较荨繱注:与空白组比较,“挥肽P妥楸冉希.;与阳托伐他汀组比较,.、~万方数据一自歧玻罨郏午妫龋瓵恍∈蠖鲋嘌不焦之火。方中黄连为君,清泻心火、中焦之火;黄芩为臣,清泻肺热、上焦之火;佐以黄柏,泻下焦火;再使用栀子,通泻三焦之火。以上四药配伍,共奏清热解毒之良效。实验和临床研究。。!1砻鳎连解毒汤对等心血管疾病均有显著的治疗作用,能明显减少患者动脉内膜斑块的面积,稳定斑块;还可以提高机体的抗氧化能力,防止各种炎症因子的破坏;还有可能通过改善血浆内源性代谢物的水平,使机体恢复正常代谢,从而达到治疗本研究采用高脂饮食诱导构建小鼠模型,周后模型复制成功。就具体研究结果而言,不同剂量的黄连解毒汤对模型小鼠的血脂水平均具有改善作用,其中以黄连解毒汤高剂量组的总体效果最好。同时,经黄连解毒汤干预后,,,也有所下降,且具有剂量依赖性,说明黄连解毒汤可能通过抑制炎症反应来维持动脉内斑块的稳定性,最终达到降低或延缓综上所述,本研究结果表明,黄连解毒汤对改善模型小鼠具有明显的防治作用,其作用机制可能是降低炎症因子水平和血脂水平,改善主动脉血管壁斑块的稳定性。同时也表明,黄连解毒汤的疗效具有剂量依赖性,高剂量的黄连解毒汤作用和阿托伐他汀相当,且相对安全,未见明显不良反应。但是本研究的样本量较少,其深入的机制与靶点有待进一步研究和探索。的目的。进程的目的。嗬急颍旃迹θ兀龋谘F治鼋嵌鹊幕屏://.:与空白组比较,“挥肽P妥楸冉希盤%挥氚⑼蟹ニ∽:与空白组比较,“挥肽P妥楸冉希盤挥氚⑼蟹ニ∽楸冉希参考文献:】涤疾病报告概要泄吩又荆:瓹,,:滦薇#略筇危贏纬苫铺教智迦冉舛局瘟冠心病闭涔焦:钗髟疲鳎幸揭┲瘟贫鲋嘌不芯拷幽弦窖а芯浚腿铮∪铮汉煊瘢龋屏舛咎婪乐涡难9芗膊〉药理作用及其临床应用研究概况阒葜幸揭┐笱学报,毒汤对动脉粥样硬化大鼠的影响闭渫酵型的中医证型澜缰幸揭灸希钛簦の。龋屏舛咎览丛醇坝靡┘亮炕凰的考证泄执幸:址嵯模盍粒敬希龋鲋嘌不锬P脱芯进展与中医病证结合的造模思路探析形饕浇岷心腑血管病杂志,,:工卓溪,班纪芳,李柔乐,,,:.,:::琄琀..珹,:.珺,..万方数据—““琈://.,周华,葛文,:琑珺甀:..疢瓵李金双,刘子怡,郭宁鹏,⑵槭嵌脉粥样硬化的始动因素颇现幸街幸┰又荆李成。华鑫,朱爱松,、抑郁的病机特点幸皆又荆:余锋,黄娜,卢建辉,┐学学报,,刘亚荣,,陈雨,徐国良,,,:姜丽,李艳,李冰涛,,,—崭錏冢琙珼矗。,—./琣“.,,.,,:琄琓,,:琁。—.琲.,,:.珻;甀,.,,琺琣琺琣,·,,産瓵琱;瑃琹—瓺籆琣—瓹籈,。,仅,。;琣琧。,,,..琣琒。,.。琣,甌籥,畇,,—万方数据黑瞄淼~一一~一~一一一一~一~一一一~~~一一一一一~一一一挂弧灰㈣蛐一一一胁~一淼裟篇一州一№一龇一Ⅷ.雹一一一一蛐~蜘一一如~蒜州黑篡州妇批一攀羔嫡∽一Ⅶ一心邶咖痴呆健脑方调控/字⑿√唧通路防治血管性痴呆鼢亳篁胍皇囊弧心妣㈣褂拇妇一川仆:茎槎印璵一氏Ⅺ舳一蛔州州哪珥鹕Ⅲ拄松耋耐緿¨哳‰£“ⅥL李伟峰睾衔,姬令山赂叭糭堇胛础∞㈣㈨姐掳∞出血甜㈨时血管性痴呆,怯梢幌列脑血管疾病所引发的认知障碍综合征,是第二大痴呆类型。,多呈波动性临床症状和阶梯式病情进展,目前尚无公认有效的治疗方法‘1静》⒉』制尚不十分明确,但关于炎症因子参与疾病进程、炎症反应诱发病理改变是主要发病机制之一的认识已被学者广泛认可;谌ü现幸揭┳?经验,本课题组前期已开展了益。肾祛痰活血法治疗的评价研究口托⊙玖俅惭橹ほ。本研究主要从炎症反应、细胞凋亡角度出发,观察痴呆健脑方对模型大鼠凋亡相关蛋白及炎症因子表达的影响,以明晰痴呆健脑方的作用机制。动物雄性大鼠唬逯柿鹤灾V菔谢菁们P耸笛槎镅吵动物生产许可证号:K卸锼茄于河南省中医院动物实验中心锸褂眯砜芍ず牛?坶¨邺耄Ⅺ山眦鸣叫ァ発恚蓦材料叫Ⅲ¨,河南郑州;幽现幸揭┐笱У诙绞粢皆海幽现V幽现幸揭┐笱У谝桓绞粢皆海幽现VR猐目的探讨痴呆健脑方调控/。字⑿√逋贩乐窝9苄猿沾舻淖饔没啤7椒按照改良双侧颈总动脉分次结扎法复制血管性痴呆大鼠模型。将籗笫笏婊治<偈质踝椋P妥椋嗄芜咂胱椋沾艚脑方高、中剂量组;采用水迷宫法评价大鼠记忆功能,苏木精伊红染色观察大鼠海马组织形态学变化,7?觳獯笫蠛B砬窬5蛲雎剩干涞缱酉晕⒕倒鄄齑笫蠛B碜橹⒔峁梗直鸩捎肦和法检测大鼠海马相关激酶琋、芴寮易搴琾结构域蛋白琋甊⒑珻峁褂虻牡蛲鱿喙匕叩阊鞍,、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶珻—、消皮素珿和蛋白表达水平,.?觳飧髯榇笫蠛B砬细胞介素,。、肿瘤坏死因子一,水平。结果与模型组比较,多奈哌齐组,痴呆健脑方高、中剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短,穿越平台次数明显增加%,目标象限时间比明显升高%。与模型组比较,多奈哌齐组,痴呆健脑方高、中剂量组大鼠海马区虽有部分核染色凋亡神经元,但神经元凋亡率明显低于模型组。与模型组超微结构不同,多奈哌齐组,痴呆健脑方高、中剂量组神经元整体形态规则,神经元间隙均匀致密,神经元结构层次分明、结构相似,核固缩、碎裂及坏死神经元极少。与模型组比较,多奈哌齐组,痴呆健脑方高、中剂量组海马区、.、和蛋白表达水平以及、、“水平均明显降低.=崧痴呆健脑方通过抑制/.字⑿√逋路相关蛋白水平,降低神经元凋亡后下游炎症因子表达水平,达到改善血管性痴呆大鼠认知、记忆功能的目的。丶蔧血管性痴呆;痴呆健脑方;炎症小体;。幌赴蛲型挤掷嗪;../甶基金项目:河南省中医药科学研究专项课题;国家中医药管理局第七批全国名老中医药专家学术经验继承工作项目幸揭┤私毯痆;中原英才计划中原青年拔尖人才项目プ橥作者简介:李伟峰,男,博士,副主任医师通信作者:秦合伟,男,博士,副主任医帅,.簀讹∞甜归蓦“.,甿.∽口∞吣眃....寸三增/\●/、

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