驴奶中分离的益生微生物的制作方法.docx

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stoimprovetheviabilityoflacticacidbacteriaafterfreezingandfreeze-drying》WorldJournalofMicrobiology&Biotechnology2005年21期,739-746页中的描述进行评估,但作一些修改。等分样品在模拟胃液(胃蛋白酶3g/L,)中温育,在温育的不同时间取出,直至180分钟,并进行铺平板。使用并接种未处理的细胞作为阴性对照。对胃液的抗性通过菌落形成单位(CFU)/mL进行评价并与阴性对照比较。2)%胆汁盐的MRS组成的模拟胆汁液中温育,最多3h,然后接种到MRS琼脂平板上,根据DeGiulio等(2005)所述。未处理的菌落用作阴性对照。对胆汁盐的抗性通过菌落形成单位(CFU)/mL进行评价并与阴性对照比较。结果在从生驴奶中分离的150个细菌菌落中,只有8个鉴定为属于乳杆菌属(暂时命名为克隆32、克隆34、克隆37、克隆38、克隆41、克隆43、克隆48、和克隆57),展示出对胃液和胆汁盐的抗性,并显示形成约75%的CFU/mL,对比于未处理的对照乳杆菌的100%。其最佳生长温度约为30至31°C。150个菌落中只出现8个展示了对模拟胃液和对胆汁盐存在的良好抗性。然后研究这些菌落的下列活性疏水性测试、筛选具有胆汁盐水解活性的培养物、抗微生物活性和抗生素敏感性。3)疏水性测试菌落潜在地附着到肠上皮细胞的能力通过使用Strus等《TheinvitroactivityofvaginalLactobacilluswithprobioticpropertiesagainstCandida))InfectiousDiseasesinobstetricsandGynaecology,2005年13卷第2期69-75页,以及Ljungh等((usaureusstrainsisolatedfromhumaninfectionsstudiedwiththesaltaggregationtest))Infectionandimmunity,1985年47期522-526页中的间接疏水性方法进行评价。菌落在MRS液体培养基中生长24h。微生物悬浮液与等体积硫酸铵混合,硫酸铵预先以不同摩尔浓度制备(范围从20mM至4M)。能够引起显微镜载玻片上可见微生物聚集的硫酸铵最小浓度与盐聚集测试成反比。等渗溶液用作对照。结果