食品中大肠杆菌o157-h7活菌的定量检测方法.docx

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43]flic上游引物:5’-TTCGCAGCATCACTGGATTC-3’[0044]flic下游引物:5’-TG-3’[0045]荧光定量PCR反应体系为20μL:DNA模板2μL,SYBRPremixExTaq?10μL,,,无菌水补足20μL。荧光定量PCR反应条件为:95°C预变性30s,紧接着95°C变性5s,62°C退火lmin40个循环。,将荧光定量PCR结果代入实施例2的标准曲线中,即可定量得到待测食品样本中大肠杆菌0157:H7。[0046]实施例4弓丨物特异性验证[0047]为验证引物的特异性,对表1提供的菌株进行基因组DNA的提取和荧光定量PCR,操作条件见实施例3的步骤5)。菌株的编号和来源及验证结果见表1,从表1中可以看出本发明提供的引物对大肠杆菌Escherichiacoli0157:H7具有较高的特异性。[0048]表1供试菌株及检测结果【权利要求】:H7(fccAericAiacoli0157:H7)活菌的定量检测方法,其特征在于包括如下步骤:1)取待测食品样本,加缓冲液碾磨制成匀浆液,离心去除食物残渣,取上清得菌悬液;2)取步骤I)的菌悬液加偶联有大肠杆菌0157:H7抗体的磁珠,室温下以10rpm的转速反应45min后,磁力架分离