非小细胞肺癌疗效相关的egfr基因突变的快速检测的制作方法.docx

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与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照(NoTemplateControl)。图3显示了用TaqMan方法检测EGFR2235D15缺失突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图4显示了用TaqMan方法检测EGFR2240D18缺失突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图5显示了用TaqMan方法检测EGFR2240D15缺失突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图6显示了用TaqMan方法检测EGFR2238D18缺失突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图7显示了用TaqMan方法检测EGFR2155G→A点突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图8显示了用TaqMan方法检测EGFR2237D15缺失突变测试结果。其中,WW为野生型纯合子阳性标准品,WV为野生型与突变型杂合子阳性标准品,VV为突变型纯合子阳性标准品。NTC为无模板阴性对照。图9显示了两种方法检测EGFR2573T→G点突变结果对照。其中,A为TaqMan方法;B为测序法。图10显示了两种方法检测EGFR2235D15缺失突变结果对照。其中,A为TaqMan方法;B为测序法。具体实施例方式本发明人针对目前现有技术中对肺癌组织中EGFR基因相关突变位点区域DNA进行测序时检测周期长、检测过程复杂等问题,经过广泛而深入的研究,设计出一套TaqMan引物和探针,从而通过荧光定量PCR技术快速准确地检出NSCLC中与Iressa和Tarceva疗效相关的包括单个核苷酸替换及小片段缺失在内的EGFR基因突变。基于此完成了本发明。基本原理本发明的方法基本原理是TaqMan荧光技术,即以TaqMan荧光探针为基础。TaqMan荧光探针为一种寡核苷酸,其两端分别标记一个荧光发射基团和一个荧光淬灭基团。当探针完整时,荧光发射基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’-3’外切酶活性将探针酶切降解,使荧光发射基团和荧光淬灭基团分离,从而通过荧光检测系统可接受到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,即荧光信号的累计与PCR产物形成的完全同步,从而实现定性和定量。Iressa及Tarceva药物疗效Iressa及Tarceva是两种目前对于部分NSCLC患者治疗最有效的药物。并且,该两种药物的疗效与NSCLC组织中EGFR基因外显子18、19、20、21上的功能突变呈正相关。研究发现,在