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肿瘤模型专题.docx


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】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。肿瘤模型专题肿瘤模型专题1/13肿瘤模型专题肿瘤模型专题最新的药效学指导原则要求化药临床行进行最少5种人源肿瘤的体内抗癌活性议论,以确立药效及抗瘤谱。瘤株对药物的敏感性经过体外优选能够说明,而体内议论更大程度上是考虑药物经体内汲取、散布、代谢此后的活性,因为当前的肿瘤模型多采纳皮下接种,其实不可以够够圆满反应药物的组织散布对其影响,因此感觉这类要求就显得不是很必需。讲解:体内的敏感性不是仅考虑汲取散布代谢的影响,一些样品,体外活性都是不错的,体内甚至是瘤内直接注射给到很高剂量都没有见效,肿瘤细胞在体内和体外的生计环境差异很大,体外模拟的生计环境圆满不可以够够表现出体内的状态。皮下接种是一个当前能找到的最好的瞒天过海了,实质上,SFDA明确表示,激励原位肿瘤模型,但是因为技术的原由,好多瘤株都没法实现。而皮下模型有它的一系列长处:坚固,便于察看,易于建立,易于控制等等,能够在必然程度上反应药物经过体内过程的疗效,因此当前只好用它来进行议论。实质上原位肿瘤模型仍旧不可以够够很好的反应临床肿瘤的特色,当前能够预示获取最好的模型应当是经过基因修饰(转基因等)的能够集中比较均匀的自觉模型,这才是和临床最凑近的肿瘤模型。但是当前的经过基因修饰的自觉肿瘤模型种类极少,并且可控制性差,周期长,因此还要经过很长时间的改良才能大规模的应用。常例的肿瘤细胞株接种后假如不可以够够成瘤,细胞悬液就会被动物吸收瘤体积可用游标卡尺量最长径(a)和最短径(b),体积计算公式:V=πab^2/6,每2-3天测一次。体积=宽^2*长/2的公式计算肿瘤体积;抑瘤率=(比较组-治疗组)/比较组*100%;;tumorsize=width2·length·.;Πab2/6;对于肿瘤体积的计算:....../6约等于/2。假如想做得讲究一点,应当用RTV计算肿瘤体积:RTV(某日某老鼠的相对肿瘤体积)=TV(丈量当日该老鼠的肿瘤体积)/TV(分组当日该老鼠的肿瘤体积)*100,在此基础进步行均匀值SD等数据的计算能否必然称重小鼠的胸腺和脾脏超出7天的腹水再传代就很简单出现血性;动物的周龄也不要太大,6周左右。传代次数太多也很简单出现血性腹水。血性腹水能够离心后加N的NH4CL溶液破红细胞,此后精准一些的控制条件(接种量,传代时间,动物周龄等)传几代,好多状况下再传一两代后会有不血性的种鼠出现,此后用这只种鼠的腹水连续传代皮下接种与剥瘤子:小鼠肿瘤剥瘤子是一个困难的过程,但是能够必然程度上的改良一下:接种的时候要精准控制接种在皮下,靠皮内会与皮肤激烈粘连,靠肌肉会与肌肉激烈粘连,并且不要肿瘤模型专题肿瘤模型专题2/13肿瘤模型专题太靠腋窝里面,能够往尾部靠一些,也能够略微的往背部靠一点,不要往腹部靠,简单使肿瘤被垫料磨烂。,ED50是体外试验中的多半有效量,一般体内实验没有近似的指标,假如想比较几个近似物的药效仍是做量效曲线比较好。剂量设置应当依据LD10(10%致死剂量,也叫最大耐受剂量)来分组,一般分别采纳1/2LD10,1/4LD10,1/7LD10或1/10LD,但最大剂量不得超出LD10。这里面还得考虑ED50,LD10与ED50的剂量相差越大越好。用LD50作为标准设置剂量是不现实的,因为动物实验是不可以够够能赞同10%以上动物死亡的。说到疗效的比较,如但是发文章,比较不同样样基团之间可能对母体抑瘤率的影响,一般做做体外试验,比一比大家的IC50就好了,不太做体内。如是真实的筛药,我个人有些看法:这个不是孤立起来看某个或许某几个剂量下谁比谁的抑瘤率高。主要要看谁更拥有可开发性。第一,要考虑它的毒性以及治疗窗口的大小,通俗的说,就是这个要在发挥疗效的剂量下,毒性能否大?比方A药,10mg抑瘤率有50%,但是体重降落了20%;而B药,10mg的时候根本无效,30mg的时候有40%的抑瘤率,60mg的时候抑瘤率高80%,并且体重几乎没有降落,这个时候A药与B药怎样比较?特别假如是企业优选新药,还要考虑成本,病人可接受度(动物上的有效剂量换算到人一天要吃2斤,这类药也是不现实的),制剂,工艺等等方面。假如纯真从药理的角度给出答案,最少要考肿瘤模型专题肿瘤模型专题3/13肿瘤模型专题虑毒性和剂量限制的问题。对于剂量选择,LD50的几分之一是一种比较通用的方法,当前相对更合理一些的剂量选择是做一个简单的多次给药的毒理试验来确立剂量,我们一般会连续给药一周,此后再察看一周,这样摸出来的最大剂量能够直接用于药效试验,此后其余的剂量都在此剂量的基础上往下减。说到给药疗程,一般初筛的药物都是连续每日给药,qd。但是给药门路,特别是与的选择,我们都是先做一个简单的PK试验察看一下,再确立,特别是假如PK试验的结果显示,血药浓度甚至达不到体外IC50的浓度,那么能否进行体内试验,就有待商议了。连续,小鼠的皮肤有时会变厚,你能够换一边给药。动物选择:KM小鼠,裸鼠,C57等均可作为,但是个人以为KM能做出来最好,毕竟比较有广泛性,仍是正常生理状态的健康动物,比较有说服力,还廉价,裸鼠或许其余特定品种,比较合适特定的瘤株对于肿瘤细胞活力的问题:一般培育的肿瘤细胞活力常常是不够的,很难在短时间内长到规定重量,因此建议最少在动物体内传2代,,要不活化也行,多接种点吧对于接种部位的问题:以小鼠为例一般能够选择腋下或许后肢,背部血管不发达,营养不够,,针头沿皮肤水平进入,此后挑起表皮,注射肿瘤模型专题肿瘤模型专题4/13肿瘤模型专题对于肿瘤重量的问题:模型组肿瘤重量应当不低于肺内原位注射制作肿瘤模型见效颇好,流程以下:麻醉->固定->皮肤消毒->剪开左边胸部皮肤,大概第2-3肋间的地点->用镊子轻轻扒开皮下筋膜,能够看到呼吸运动的肺叶->将准备好的肿瘤细胞注射入肺,<30微升->:#20#25(14G12G)L65mm;用途:供人体胸腔穿刺,钩取胸膜活体组织用开始做肿瘤药效议论,应当采纳s180这些小鼠肿瘤模型。一个方面这些肿瘤对于药物很敏感,并且周期短,开支也少。但假如要成药,裸鼠模型是必需的。一般瘤重的SD在均匀值的70~80%以下就还凑活,美丽一点的是在30%以下,实在不可以够够,100%也牵强,就是特别难看,但是SD越大,统计上就越不利皮下肿瘤模型中,腋下最合适肿瘤生长。接种时由裸鼠体侧腰部稍靠上的部位进针,要保证与接种点的距离小于针头的长度,向头部方穿行,绝对不可以够够刺破皮肤或许刺破肌肉层,当针头抵达接种位点时注射,退出针头,这样操作的目的其实不圆满部是防范漏液,其实娴熟后,不需要皮下穿行也不会漏液,主假如防范污染,进针点还有少许污染的可能性的,针头在皮下穿行一段后,接种点离进针点较远,最大限度减少污染的可能。假如是药效试验,不建议你用手术标本,因为SFDA的临床前研究指导原则上明确指出要用建株的肿瘤株进行试验,因为用手术标肿瘤模型专题肿瘤模型专题5/13肿瘤模型专题本的试验可重复性太差一般用4-5WK,体重15-17g鼠,年青鼠接种瘤简单长栽种肾被膜下:第一该区免疫宽免,,此后栽种。注意:肾被膜和肾脏是有一个空隙能够用镊子在被膜下赶肿瘤组织到远离撕张口处,,基本上没有可成腹水的,,其余,因为免疫系统的进一步缺少,肿瘤生长的进度可能会比nudemice上更快一点接种后,用洁净的棉签按住注射部位才拔针,拔针后再按住10秒种左右,,传一代就很差了,没有几个成瘤的,到第三代就三军淹没不赞同用7901这个瘤株,国际公认度比较差分组要求平行性,尽量减小组间差异,组内差异是实质状况的反应。你能够依据肿瘤体积分层随机分组,这样平行性比较好肿瘤细胞悬液裸鼠接种前稀释见效次序:相应的无血清培育基>PBS>saline此刻常用的阳性比较药物是CTX和cisplatin,其余乳腺癌能够用Taxol。阳性药的剂量门路和疗程不要乞降样品一致,但是给药门路尽量同样。还有,最好采纳系统近似或许构造近似的阳性肿瘤模型专题肿瘤模型专题6/13肿瘤模型专题比较。一般来说阳性比较的控制率都会在60%以上或许更大,少许状况下只有50%左右。,此中应包含II期临床试验中拟优选的肿瘤组织种类。针对每一种人癌移植瘤模型,介绍采纳相对肿瘤增殖率T/C(%)作为试验议论指标,议论标准平常为:T/C(%)>40%为无效;T/C(%)≤40%,并经统计学办理P<为有效。在体内有效性试验采纳的所有人癌移植模型中,一般最少应有1/3达到有效标准。讲解:对于T/C<40%,依据这个标准,好多现有的一线化疗药物都会被裁汰适于接种的瘤源的直径最好为1cm或许稍大一点,直径2cm可能对于有些瘤株来说会太大了一点。一般来说,插块法,一个瘤源接种30只动物是没有问题的,匀浆法一般2只也能够接种30只了新的抗肿瘤药物指导原则上重申要3代以上才能用,并且不可以够够超出15~20代(人肿瘤)。只有少部分的小鼠实体瘤能够腹水传代,人实体瘤几乎没有能够腹水传代的一般来说,小鼠肿瘤比较介绍路易斯肺癌和B16。国内的S180其实不好,各实验室之间的变异很大。外国基本都不用它。其实其实不是因为S180有多好大家才采纳他,而是他进行实验的成本低,周期短,操作较简单肿瘤模型专题肿瘤模型专题7/13肿瘤模型专题灌胃药溶解用生理盐水能够吗:不用然,依据混悬见效来看,一般多用%***纤维素钠(CMC-Na)实体肿瘤不可以够够够采纳生命连续时间这个指标,这个是明确有规定的正常的实体肿瘤都是越长越大,最后可能会溃破,但是没有消亡这个现象,假如肿瘤整体的自觉消亡,说明模型有问题,最大可能是被污染了出针挂组织的问题,重点在于针头的磨制,在针后部的小流行于小缺口吻合后,实体针曲折方向应当与套管针磨制的斜面一致,接种时,实体针要推终归,也就是后边的小流行与小缺口吻合,此后针头“舔住”肌肉层转一圈再退针,还有就是瘤块必然要完全塞入针头内,外面不可以够够有漏出来的。、H22不需要丈量肿瘤体积,试验结束后直接剥取肿瘤成瘤重瘤株皮下成瘤率好,那么到了原位应当会更好建议最好流水线操作,保证每一个步骤都是同一个人做终归的,比方插块法,能够一个人切,一个人塞瘤块,一个人接种;比较禁忌每个人自己切自己塞自己接种,,宿主一般多用C57小鼠,因为这个肿瘤的细胞是黑色的,用它做肺转移,在白色的肺叶上是黑色的转移灶,很简单分辨。"环磷酰氨"或"放射线照耀",有益肿瘤模型专题肿瘤模型专题8/13肿瘤模型专题于移植瘤的生长对于水不溶药物:低浓度的DMSO的确是一个不错的解决手段,自然这么做进行报批是不可以够够够被接受的,因为临床不同样样意这样的制剂血液给药,但是动物实验将就能够,1%的浓度很低了,实质上,给小鼠(包含裸鼠)尾静脉注射DMSO,5%以下基本没有任何反应,10%的时候需要较慢的速度注射,但是动物也能够接受,再高就不可以够够了瘤内注射:总注射量只好为瘤体积的10%,最多20%,瘤内注射有必然的技巧,我们就是用的4号针头,但是进针点要远一点,让针头在皮下多走一段,此后再刺入瘤内,一个肿瘤能够多点注射,但是必然要注意,刺入一点注射完成此后,针头退出瘤组织,但是绝对不可以够够退出皮下,此后换个地方再刺进去,一个点只好注射10~15ul,不要多打,比方要注射20ul,就分两个点注射,每个点10ul。肿瘤模型一般常用的有小鼠模型和人肿瘤裸小鼠移植瘤模型。此顶用得最多的是皮下模型,其余还有腹水(或许尾静脉注射)以及原位模型,其余的模型极少用小鼠模型分三大类:a)第一类:以S180、EAC、H22等为代表的,他们的宿主小鼠多项选择用KM,可产生腹水,也可在皮下成瘤。多以腹水传代,实验时抽取腹水,经过必然稀释后皮下接种建立模型,接踵后次日开始给药,给药7到10天,接种10天后结束试验,剥取肿瘤模型专题肿瘤模型专题9/13肿瘤模型专题肿瘤称瘤重。对于建立瘤种:能够用体外细胞株培育后,用PBS悬浮至1~3×106/mouse,接种即可,最好用6号左右的针头,就是常用的2ml一次性注射的针头。对于腹水传代:察看到第一代的种鼠肚子较大后(一般约8~9天左右),能够传代,传代时取1ml注射器,用2ml注射器的针头,种鼠腹部消毒后直接将针头插入抽取腹水即可,注意不要把针头插得很深,尽量浅一点,还能够够够把老鼠拎起来,利用重力,让腹水集中在某处便于抽取,一般抽个就能够了,不用离心,直接用PBS3~6倍稀释后,接种到新的老鼠腹腔,腹水颜色为白色或许略有发黄都是正常的,但是血性腹水说明不好,需要注意调整,第二代此后,尽量6~7天的时候传代,不要等的时间太久,不然腹水简单血性。三代后可用于试验。对于接种进行试验:这个时候抽取的腹水需要量比好多,一般需要处死种鼠后,当心地用消毒眼科剪刀镊子剥开腹部皮肤,注意不要弄破肌肉,此后,用镊子(最好是那种前面有倒勾的镊子,学名忧如是唇型镊)拎起腹部的肌肉,用剪刀剪开一个小口,此后用玻璃滴管或许去掉针头的注射器汲取腹水。此后经过必然的稀释后,接种到小鼠的腋下。对于稀释量,各个实验室的状况都不同样样样,最好研究一下,开始的时候能够合适的计数,但是要用台盼兰染色肿瘤模型专题肿瘤模型专题10/13肿瘤模型专题

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