《实验基本技术》.ppt

该【《实验基本技术》 】是由【相惜】上传分享，文档一共【80】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【《实验基本技术》 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。实验根本技术精选课件细胞培养根本技术精选课件无菌操作技术消毒(disinfection)和消毒剂(disinfectant)灭菌(sterilization)防腐(antisepsis)和防腐剂抑菌(bacteriostasis)和抑菌剂(bacteriostatic)无菌(asepsis)无菌技术/无菌操作(antiseptictechnique)精选课件【培养前准备】在开始实验前要制定好实验方案和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求,准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内,然后开始消毒。这可以防止开始实验后,因物品不全往返拿取而增加污染时机。【操作野消毒】%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用),紫外线照射消毒30-50min,超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线消毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线,消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置,否那么会遮挡射线降低消毒效果。—些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。精选课件【洗手和着装】原那么上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时,可穿着细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时,因整个前臂要伸入箱内,应着长袖的清洁工作服,并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。【火焰消毒】在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时,首先要点燃酒精灯。以后一切操作,如按装吸管帽、翻开或封闭瓶口等,都需在火焰近处并经过烧灼进行。【操作】进行培养时,动作要准确敏捷,但又不必太快,以防空气流动,增加污染时机。不能用手触及已消毒器皿,如已接触,要用火焰烧灼消毒或取备品更换。、将血球计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板上。 2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片和计数板之间。 3、静置3分钟。 4、镜下观察,计算计数板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算: 细胞数/ml=4大格细胞总数/4×10000 注意:镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团,应按单个细胞计算,假设细胞团占10%以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。精选课件根据细胞生长的恃点,传代方法有3种::离心〔1000转/分〕去上清,沉淀物加新培养液后再混匀传代。直接传代法:悬浮细胞沉淀在瓶壁时,将上清培养液去除l/2一2/3,然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代。〔Hela细胞〕此类细胞局部呈现贴壁生长现象,但贴壁不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁脱落下来,进行传代。。%的胰蛋白酶液。细胞传代方法精选课件贴壁生长细胞传代方法1吸光培养瓶中的培养液2参加1-%的胰蛋白酶液(以消化液能覆盖整个瓶底为准〕 静置2-10min〔显微镜下动态监测〕。3吸去胰蛋白酶液,参加培养液。4用吸管吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,形成细胞悬液。5离心,细胞沉淀用培养液制成悬液。5吸取1/10—1/40细胞悬液,接种于新的培养瓶内。6加适量新鲜培养液于接种了细胞悬液的新培养瓶内。7将后者放入培养箱中培养。精选课件