抗-GPC3抗体的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究的中期报告.docx

该【抗-GPC3抗体的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究的中期报告 】是由【niuww】上传分享，文档一共【2】页，该文档可以免费在线阅读，需要了解更多关于【抗-GPC3抗体的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究的中期报告 】的内容，可以使用淘豆网的站内搜索功能，选择自己适合的文档，以下文字是截取该文章内的部分文字，如需要获得完整电子版，请下载此文档到您的设备，方便您编辑和打印。抗-GPC3抗体的制备及肝癌循环肿瘤细胞检测方法研究的中期报告本项目旨在制备抗Glypican-3(GPC3)的单克隆抗体,建立一种高效、灵敏的检测肝癌循环肿瘤细胞的方法。一、抗体的制备::首先,从肝癌细胞系中克隆GPC3基因,将其连接至表达载体,经过转染和筛选,最终获得稳定表达GPC3重组蛋白的细胞株。将细胞培养至对数生长期,收集细胞,利用超声及冻融法破碎,离心后收集上清液。采用亲和层析柱(Ni-NTA)和流动层析柱(SephacrylS-200HR)进行纯化,最终获得纯度高于90%的GPC3重组蛋白。:利用GPC3重组蛋白免疫BALB/c小鼠,并经过多次免疫、融合和筛选,最终获得3株高亲和力、高特异性的单克隆抗体。经过酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫印迹(Westernblot)和免疫荧光染色等方法的验证,结果表明,三株单克隆抗体对GPC3有高度的特异性和亲和力。二、肝癌循环肿瘤细胞的检测方法::将血样中的肝癌循环肿瘤细胞用Ficoll-Paque离心,洗涤后转移到无血清培养基中培养至对数生长期。:将制备好的抗GPC3单克隆抗体连接至磁珠,与培养好的肝癌循环肿瘤细胞进行反应,用磁力分选装置将肝癌细胞分选出来。-PCR检测:利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,特异性检测肝癌循环肿瘤细胞中的GPC3mRNA表达水平。:用制备好的抗GPC3单克隆抗体进行免疫荧光染色,检测肝癌循环肿瘤细胞中GPC3蛋白的表达。初步结果表明,制备的抗GPC3单克隆抗体具有良好的特异性和亲和力,肝癌循环肿瘤细胞检测方法也取得了一定的进展。未来将进一步完善方法,并在临床应用方面进行研究。