一种TAT-RhoGDI2融合蛋白及其制备方法和应用的制作方法.docx

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o⑶12融合蛋白的纯度,浓度及纯化工艺的回收率。[0054]通过以上三步纯化操作,,纯度为93%的TAT-Rho⑶12融合蛋白。回收率达到36%。[0055]-种TAT-Rho⑶12融合蛋白的应用,所述的TAT-Rho⑶12融合蛋白用于抑制膀胱癌T24细胞转移。[0056]体外检测TAT-Rho⑶12融合蛋白对膀胱癌T24细胞转移的抑制作用。采用Transwell分析法检测TAT-Rho⑶12融合蛋白对膀胱癌T24细胞转移的影响。具体操作如下:[0057](1)活化并培养膀胱癌T24细胞。[0058](2)Transwell小室铺基质胶。水化基质胶:将小室放入培养板中,在上室加入300μ1预温的无血清培养基,室温下静置15-30min,使基质胶再水化,吸去剩余培养液。[0059](3)制备细胞悬液。胰酶消化细胞lmin,终止后离心弃去培养液,用PBS清洗2遍,用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度为3X105个/ml。[0060](4)接种细胞。将Transwell小室放置到24孔板上,取200μ1细胞悬液加入Transwell小室。在24孔板下室加入600μ1含10%FBS培养基。注意下层培养液与小室之间不能产生气泡。[0061](5)用TAT-Rho⑶12融合蛋白处理Τ24细胞。分别用0ηΜ、5ηΜ和20ηΜ的TAT-Rho⑶12融合蛋白对