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齐全版(荧光PCR技术)幻灯片.ppt

文档分类：医学/心理学 | 页数：约60页举报非法文档有奖

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文档列表 文档介绍

实时荧光定量PCR技术
一、荧光定量 PCR仪
荧光定量PCR仪是一种带有激发光源和荧光信号检测系统的PCR仪,通常配有电脑系统及相应的分析软件。
起始定量与终点定量
起始DNA量是“天然”的量,更有意义;终点DNA量是经过PCR“加工”,存在部分失真
起点定量重现性好;终点定量误差大
由于PCR扩增效率的差异使得相同
的样品扩增结果存在很大的差异
相同模板进行96次扩增的扩增曲线图
实时在线监控
能够实时地观察到产物的增加,直观地看到反应的对数期
降低反应的非特异性
使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合,提高了PCR反应的特异性
增加定量的精确性
全程监控,准确的算法进行定量
减少污染
采用闭管检测,不需PCR后处理,并采用dUTP-UNG酶的防污染系统,扩增和检测一次同时完成,避免假阳性。
结果分析更加快捷方便,无需跑胶
光谱分析仪直读结果,自动分析, 增强了灵敏性和客观性。
与普通PCR的区别(二)
实时荧光定量 PCR(real-time PCR)
应用方法:通过荧光染料或荧光标记的特异性探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控扩增反应中每一个循环产物荧光信号,结合相应的软件对结果进行分析,从而实现对起始模板定量及定性分析。

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