细胞生物学实验-Hela细胞培养.ppt

Hela细胞培养及相关生理指标检测
细胞培养的基本概念
传代培养
细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中。培养细胞的“一代”,不表示细胞分裂一次,而是指培养细胞从接种到再次转移培养的过程。在一次传代培养中,细胞能倍增3-6次。
原代培养
取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养。一旦进行传代培养,便不再是原代培养,而改称为细胞系。
细胞培养 培养单个细胞悬液
组织培养 培养组织块(~1 mm3)或薄片( mm3 )
器官培养培养一部分或整个器官
人平滑膜细胞培养24h后贴壁生长,平滑膜组织中主要有两种细胞:成纤维细胞样形态呈树枝状贴壁生长;巨噬样平滑膜细胞为单核/巨噬样细胞形态,分裂增殖较慢(箭头处)
原代培养的新生大鼠心肌细胞,细胞形态以梭性、多角形为主
原代培养细胞的培养周期
原代培养期传代培养期衰退期
初代培养
有限细胞系
无限细胞系
接种培养
第一次传代
老化
死亡
转化
传代间隔
指数细胞数量
4
6
8
10
12
14
16
18
0 2 4 6 8 10 12 14 16
周
指数细胞数量
细胞系(cell line):
原代培养物成功传代后,则称之为细胞系。如细胞系的生存期有限,则称之为有限细胞系(finite cell line);已获无限繁殖能力可以持续生存的细胞系,称为连续细胞系或无限细胞系(infinite cell line)。无限细胞系大多已发生异倍化,具异倍体核型,有的可能已成为恶性细胞,因此本质上是发生转化的细胞系。无限细胞系有的只有永生性(或不死性),但仍保留接触抑制和无异体接种致癌性;有的不仅有永生性,异体接种还有致瘤性。
细胞株(cell strain/stable cell line):
通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得具有特殊性质或标志物称为细胞株。细胞株的特殊性质或标志物必须在整个培养期间始终存在。由原细胞株进一步分离培养出与原株性状不同的细胞群,亦可称之为亚株(substrain)。细胞株的遗传物质没有发生变化,但是不能无限传代。
克隆(clone):
亦称无性繁殖系或简称无性系。对细胞来说,克隆是指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。
细胞培养方式大致可分为两种:一种是群体培养(mass culture),将含有一定数量细胞的悬液置于培养瓶中,细胞贴壁生长形成均匀的单细胞层或者悬浮生长;另一种是克隆培养(clonal culture),将高度稀释的游离细胞悬液加入培养瓶中,各个细胞贴壁后,彼此距离较远,经过生长增殖每一个细胞形成一个细胞集落,称为克隆(clone)。一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。
培养细胞的特性
培养细胞的生长方式:
贴附生长:
必须贴附于支持物表面才能生长。多为各种实体瘤细胞
悬浮生长:
于悬浮状态下即可生长,不需要贴附于支持物表面。多为各种造血系统肿瘤细胞
每代贴附生长细胞的生长过程:游离期;贴壁期;潜伏期;对数生长期;停止期(平台期)
THP-1细胞(人单核巨噬细胞),圆形,悬浮生长
HepG2(人肝癌细胞)细胞,梭形,贴壁生长
游离期:
细胞接种后在培养基中呈悬浮状态,也称悬浮期。此时细胞质回缩,胞体呈圆球形。10分钟-5小时。
贴壁期:
细胞附着于底物上,游离期结束。大部分细胞株在10分钟-5小时内贴壁。
底物:胶原、玻璃、塑料、其它细胞等
血清中有促使细胞贴壁的球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白(生长基质),这些带正电荷糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底物上,悬浮细胞再附着在吸附有促贴壁因子的底物上。
高级培养瓶多涂有生长基质以帮助细胞贴附。
细胞贴壁的基本过程