王怀栋上课 基因工程的基本操作程序.ppt

基因工程的基本操作程序及基因工程的应用
聊城三中王怀栋
2016--2--26
①目的基因的获取
②基因表达载体的构建(核心)
③将目的基因导入受体细胞
④目的基因的检测与鉴定 P8
基因工程基本操作的四个步骤
一、目的基因的获取
(一)、目的基因主要是___________________
编码蛋白质的基因
(二)、获取目的基因的常用方法
从基因文库中获取
利用PCR技术扩增
人工合成
未知
已知
P8
1)基因文库?P9
1. 从基因文库中获取目的基因
将含有某种生物不同基因的许多DN***断,导入到受体菌的群体中,各个受体菌分别含有这种生物的不同基因,称为基因文库
2)基因文库的种类:
种类
基因组DNA文库:含有一种生物的全部基因
部分基因文库:只包含了一种生物的部分基因,
如:cDNA文库
cDNA文库的构建-----反转录法:
以目的基因转录成的信使RNA为模板,反转录成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成双链DNA,从而获得所需的基因。
杂交双链
(单链RNA/单链DNA)
单链DNA
双链DNA
(cDNA)
目的基因的mRNA
某种酶
DNA聚合酶
反转录酶
3)目的基因获取的依据: P9
基因的核苷酸序列
基因的、

、
基因的、
基因的。
基因在染色体上的位置
转录产物mRNA
翻译产物蛋白质
功能
①概念:
PCR全称为_______________,是一项在生物____复制________________的核酸合成技术。P10第一段
多聚酶链式反应
体外
特定DN***段

③过程:
②前提条件:
有一段已知目的基因的序列,以使根据这一序列合成。
P10第二段
核苷酸序列
引物
1. 变性(90-95℃)双链DNA模板在热作用下,_____断裂,形成________
氢键
单链DNA
(55-60℃)温度降低, 与DNA模板结合,形成局部______。
双链
引物
(70-75℃)
在的作用下,从引物的连接,合成与模板互补的DNA
链。
3′端
脱氧核苷酸
Taq酶
动态演示具体过程