包被抗体纯度对HBsAg ELISA检测体系的影响论文.pdf

目录
中文摘要…………………………………………………………………………… 2
英文摘要…………………………………………………………………………… 3
第 1 章前言………………………………………………………………………… 4
HBV 简介……………………………………………………………………… 4
HBV 的传染………………………………………………………………… 5
国内外研究现状……………………………………………………………… 6
本实验研究目的和内容…………………………………………………… 10
研究方法和技术路线………………………………………………………… 10
第 2 章试验材料与方法…………………………………………………………… 12
试验仪器设备…………………………………………………………………… 12
试验试剂………………………………………………………………………… 12
试验方法………………………………………………………………………… 13
包被抗体纯化与鉴定……………………………………………………… 13
确定最适包被抗体浓度实验………………………………………………… 16
包被抗体浓度对 ELISA 体系影响实验…………………………………… 17
第 3 章试验结果与讨论…………………………………………………………… 20
抗体纯化后的蛋白质浓度测定结果………………………………………… 20
最适包被抗体浓度实验结果…………………………………………………… 21
包被抗体纯度对 ELISA 检测体系的影响…………………………………… 21
对体系灵敏性的影响……………………………………………………… 22
对体系稳定性的影响……………………………………………………… 23
第 4 章结论与展望………………………………………………………………… 25
参考文献……………………………………………………………………………… 27
致谢…………………………………………………………………………………… 29
附录:译文及原文……………………………………………………………………… 30
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包被抗体纯度对 HBsAg ELISA 检测体系的影响
摘要:乙型肝炎(乙肝)是一种由乙型肝炎病毒引起的传染性疾病,严重危害健康,影响生活质量。
我国患有乙肝的人数众多,约占总人口数的 %。所以,研究乙肝很有意义。
本研究将从抗-HBs 抗体阳性血样中提取抗体,用于包被酶联免疫吸附测定(ELISA)检测 HBsAg
体系的聚苯乙烯微孔板,建立 ELISA 检测体系。分别采用盐析法和离子交换层析法纯化抗-HBs 抗体,
通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰***凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定所纯化的抗体的纯度。鉴定结果表明通
过盐析法所获得的抗体纯度较低,而离子交换层析法进一步纯化后可获得纯度较高的抗体。采用这
两种不同纯度的抗体包被聚苯乙烯微孔板,确定最适抗体稀释度为 1:500,并以此稀释度稀释抗体,
包被微孔板,构建两个检测 HBsAg 的 ELISA 体系。按照 ELISA 操作步骤进行实验,检测 45 份血样,
比较两组实验的阴阳性检出率结果,并对照 ELISA 及 PCR 商品试剂盒的结果,分析抗体纯度对体系
灵敏性的影响。选取 4 份阳性血样,平行检测 10 次,计算各组的误差并分析包被抗体纯度对体系稳
定性的影响。
实验结果显示 ELISA 体系对包被抗体的要求较高,高纯度的抗体可以获得较好的实验结果,而
纯度低的抗体会降低体系的稳定性和灵敏性等。本研究通过盐析法和离子交换层析法结合获得了高
纯度抗-HBs 抗体,用于包被 ELISA 微孔板构建检测 HBV 的 ELISA 体系,可以更好、更快、更精确地
检测出 HBV,使 HBV 感染者能够获得及时有效的治疗。
关键词:乙型肝炎病毒(HBV);抗-HBs 抗体; ELISA;盐析法;离子交换层析法;SDS-PAGE
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The affections of the purities of coated antibodies in the ELISA
system for HBsAg
Abstract: The hepatitis of B type (HB) is a kind of infectious diseases caused by hepatitis B virus (HBV),