对生长及凋亡作用的实验研究.doc

对生长及凋亡作用的实验研究.doc对生长及凋亡作用的实验研究
摘要:目的利用血清药理学的方法,观察荔枝核含药血清体外的抑制肿瘤细胞生长;并研究荔枝核对小鼠S180,EAC体内、外细胞生长及凋亡作用。方法小鼠 S180,EAC细胞混悬液用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液,在给药前24 h, ml。荔枝核水提液对小鼠S180,EAC抑瘤实验连续给药10 d。测定肿瘤作用与细胞凋亡表达。结果荔枝核提取物30%含药血清高中剂量和20%含药血清高剂量对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑瘤作用, Hochest染色肿瘤细胞出现凋亡形态;而流式细胞仪检测可见30%%,%%,明显高于正常血清组。荔枝核水提物能够明显抑制S180,EAC肿瘤的生长(P<),%。%;结论荔枝核具有抑制小鼠S180,EAC体内、外细胞生长的影响,促进肿瘤细胞的凋亡,从而表现抗肿瘤的作用。
关键词:荔枝核小鼠 S180 EAC 抑瘤作用凋亡
荔枝核为无患子科植物荔枝Litchi chinensis Sonn的干燥成熟种子。夏季采摘成熟果实,除去果皮及肉质假种皮,洗净,晒干[1]。荔枝及荔枝核的经济和药用价值逐渐受到关注,近几年来已有多篇报道用荔枝核中药治疗糖尿病的经验[2],荔枝核具有调血脂、保肝以及抗氧化等作用[3,4],特别是荔枝核的多糖成分在抗肿瘤、提高机体免疫活性方面具有较大的关注。基于以上的研究,本实验进一步研究荔枝核对荷瘤小鼠体内、外细胞生长及诱导细胞凋亡的影响报道如下。
1 材料
动物清洁级,新西兰雄性大白兔,购自广东省医学实验动物中心,实验动物质量合格证号:粤监证字2006A001。SPF级小鼠,购自广东省医学实验动物中心,实验动物质量合格证号: 粤监证字2006A018。
仪器CO2恒温培养箱(Thermo fora美国);AIR TECH型医用超净台(苏净集团安泰公司);XSZ-D型倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂);荧光显微镜(Olympus Japan);BIO-RAD-450型酶标定量测试仪(美国);流式细胞仪(FACSCalibur型Becton Dickinson);BIO-RAD 电泳仪(美国);Eppendorf 低温高速冷冻离心机(德国)。
试药荔枝核提取物:颗粒(颗粒∶生药=1∶10),广东一方制药业有限公司;批号(0604229)。
环磷酰***(CTX):江苏恒瑞医药股份有限公司,批号:05010821。
RPIM 1640培养液(GIBCO公司产品),批号1285082;青霉素、链霉素(广州白云山天心制药股份有限公司);新生牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司产品),批号060704;胰蛋白酶(DIFICO公司生产);四***偶氮唑盐(MTT,SIGMA公司产品);二***亚砜(DMSO;美国Amresco公司产品);Hochest33258(碧云天生物技术公司);PI染料 sigma;细胞裂解液(碧云天生物技术公司); BAX抗体(cell signaling); BCL-2抗体(santa cruz);GAPDH抗体(C