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酶的沉淀分离.ppt


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文档列表 文档介绍
蛋白酶分离纯化技术
沉淀分离
徐杰 2008
第五节沉淀分离
一、盐析沉淀法
₮盐溶的定义和原理
一般在低盐浓度的情况下,蛋白酶的溶解度随盐浓度的升高而增加
原理
盐正负离子使电荷的相互排斥作用増强;同时离子的存在使溶液中水之间的作用加大。
盐浓度提高到一定浓度后,蛋白酶的溶解度随盐浓度的升高而下降
原理
♠盐离解为正负离子,中和了蛋白的电荷,使电荷的相互排斥作用消失
♣水化膜破坏,蛋白原来分布在蛋白内部的疏水性氨基酸暴露在表面,疏水性氨基酸有相互聚集在一起
₮盐析的定义和原理
₮盐析的特点
※可浓缩蛋白
※可分离蛋白,不同蛋白沉淀所需的盐浓度不同
不同蛋白的疏水性氨基酸的数量和种类有所不同
二影响蛋白溶解度的因素
⃓ S:蛋白酶在离子强度为I时的溶解度(g/L)
⃓ S。:蛋白酶在离子强度为0时(即纯溶剂中)的溶解度(g/L)
⃓ Ks —盐析常数
⃓ I —离子强度
与蛋白特性、溶液温度、pH、盐的特性和浓度有关
₮ S。在一定的温度和pH下为常数
₮β主要决定于蛋白酶的性质,也与温度和pH值有关。温度和pH值一定,β为常数
₮ Ks(盐析常数)
和盐的离子价数成正比,与离子半径和溶液的介电常数成反比;也与蛋白质性质有关,和溶液温度和酸碱度等有关。
₮离子强度
※对于某一蛋白酶,在温度和pH等盐析条件已确定(β确定),所用的盐确定(即Ks确定)之后,蛋白酶的溶解度决定于溶液中的离子强度
※离子强度是指溶液中离子强弱的程度,与离子浓度和离子价数有关。
三盐析中通常采用的盐
₮强酸弱碱盐,如硫酸铵等(最常用)
优点:
˧不影响酶的活性
˧硫酸铵在水中的溶解度大而温度系数小(在25℃时,溶解度为767g/L;在0℃时,溶解度为697g/L) 。
˧分离效果好
˧价廉易得
缺点
˧硫酸铵进行盐析时缓冲能力差(溶液变酸)
˧铵离子会干扰蛋白质测定

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  • 时间2018-02-21