糖化酶检验操作规程.doc

检验操作规程
编号
检验标准
GB8276-2002
项目
糖化酶活力的测定
编制
审核
仪器
具塞比色管: 10 ml
秒表
比色皿
恒温水浴锅
试剂
乙酸-乙酸钠缓冲溶液()。
硫代硫酸钠标准溶液(Na2S2O3,)。
碘溶液(1/2I2,)。
氢氧化钠溶液(NaOH,)。
200g/L可溶性氢氧化钠溶液。
硫酸溶液(2mol/L)。
20g/L可溶性淀粉溶液。
10g/L淀粉指示液。
分析步骤
(1)待测酶液的制备称取酶粉1~2g,(),先用少量的乙酸缓冲液溶解,并用玻璃棒捣研,将上清液小心倾入容量瓶中。沉渣部分再加入少量缓冲液,如此捣研3~4次,最后全部移入容量瓶中,用缓冲液定容至刻度(估计酶活力在100~250u/ml范围内),摇匀。通过4层纱布过滤,滤液供测定用。
(2)测定于甲、乙两支50ml比色管中,分别加入可溶性淀粉25ml及缓冲液5ml,摇匀后,于40℃恒温水浴中预热5min。在甲管(样品)中加入待测酶液2ml,立刻摇匀,在此温度下准确反应30min,,摇匀,将两管取出迅速冷却,并于乙管(空白)中补加待测酶液2ml,吸取上述反应液与空白液5ml,分别置于碘量瓶中,准确加入碘溶液10ml,再加氢氧化钠溶液15ml,摇匀,密塞,于暗处反应15min。取出,加硫酸溶液2ml,立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定,直至蓝色刚好消失为其终点。
计算
X=(A-B)c×××1/2×n×2=×(A-B)c×n
式中 X——样品的酶活力(u/g或u/ml)
A——空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积(ml)
B——样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积(ml)
c——硫代硫酸钠溶液的浓度(mol/L)
——与1ml硫代硫酸钠标准溶液(1mol/L)相当的以克表示的葡萄糖的质量
——反应液的总体积(ml)
5——吸取反应液的体积(ml)
1/2——吸取酶液2ml,换算为1ml
n——稀释倍数
2——反应30min,换算成1h的酶活力系数所得的结果表示至整数