[硕士论文]白血病相关融合基因的克隆和功能研究.pdf

上海第二医科大学
博士学位论文
白血病相关融合基因的克隆和功能研究
姓名:顾柏炜
申请学位级别:博士
专业:内科学(血液病)
指导教师:陈赛娟
20040501
白血病相关融合基因的克隆和功能研究中文摘要外显子与基因的磐庀宰酉嗳诤稀R虼耍颐易位的病人的分¨基因的磐庀宰酉嗳诤希狭训惴直鹞挥儿颊叩姆肿由镅Х治鱿允綨基因的号我们从急性髓系白血病伴染色体;籷孜的病例入手,充分利用当前人类基因组研究所取得的大量信息,定位克隆染色体因,进而对蛳喙厝诤匣虻闹掳籽2』平了初步的研究。发性急性髓系白血病成年病人迸行了深入研究,采取了定染色湃旧迳系亩狭训愠醪蕉ㄎ挥琛俊縋的日本人所发现的一一例伴染色体;易位的小所发现的扇薃中的融合方式是琀;易位的受累基我们对三例伴;籷孜坏挠忻魅贩中偷脑位候选克隆的策略,以确定该易位的受累基因。首先通过常规的分子细胞遗传学方法检测出;体易位。并将虻’端。经过证实后,我们又通过末端快速扩增技术发现了位于染包体幕锇榛騂我们所发现的三例伴;籷子生物学分析均显示虻磐庀宰佑虻哪诤虷哪诤觢。此前,;融合基因的主要形式。,【:海第二医科火学博士学位论文
有意义的是,除了目前被大多数研究者发现的异常转录激活能力以外,我们首次在喙厝诤系鞍字蟹⑾忠斐WB家种苹钚缘拇嬖冢诟湃旧宥瘫凵系闹匾5闹琢鲆种苹颉V辽种抑通过综合研究琍一和籔一结合域融..,。允境龊芮康姆词郊せ畹奶匦裕徊降难位或非平衡易位较为少见。特别需要指出的是,∪推测,大多数伴染色体;不平衡易位。我们的研究中所发现的缺失部分包含一组位控能力,我们发现喙厝诤匣蚓哂幸斐WB蓟钚缘两个特征,即转录激活和转录抑制。合蛋白都具有结合带有钚缘暮四诠布せ钗顲的能结合能力均有不同程度的增加。大多数染色体易位为交互易位或平衡易位,而非交互易中的两例有染色体的蚨狭训’端至染色体端粒末端在分子细胞遗传学水平的缺失。因此,我们易位的病人应为癌基因在染色体被发现,分别称为赪痵瘤等中发生缺失或突变。近年的研究发现,癌基因、抑癌基因之间可发生相互作用,共同引起肿瘤的发生。籋这三个喙厝诤匣虻慕峁沟淖B嫉诤蛋白在用狦ǖ老低撤治鍪毕允境鼋锨康姆词激活特性。需要指出的是,野生型隚腄究表明甈力,而且与野生型、虷啾龋堑于蚇一和籷上海第二医科大学博士学位论文
因转录本,<刂频谋颊咧蟹直鸫嬖诔ば汀⒍绦秃捅湟煨蚉—诤匣因此对缘难芯渴茿研究的热点。在绝大多数明了。目前知道变异型猂融合基因的断裂点位于接近生理条件下的瓼基因的从υ<刂频谋制荧光素酶的活性,进一步的研究发现,籔A的能力。而该融合蛋白在体外蛋白结合实验中可以与核内糠值腇馗雌吻蚰技四诠惨种莆锏告基因系统研究中,我们发现基因可以明显抑共抑制物岷希送庾榈鞍兹ヒ阴;敢种萍告基因系统抑制作用。因此我们认为,甈诤基因所获得的异常转录抑制活性是由于该融合蛋白的蛋白所参与的转录复合体中而形成的。我们认为,这两种异常转录活性的存在可能在造【蠓只的不同阶段影响不同的基因表达,最终都对白血病的发生发展起重要的作用。维甲酸的生理活性必须通过维甲酸受体和维生素芴趴煞⒒幼饔谩<毙栽缬琢O赴訟血病悄壳拔ㄒ挥萌ǚ词轿姿只瘟朴行的人类恶性肿瘤,现在已知蛲ㄎ挥湃旧宓长臂带,在木浜捅湟煨腿旧逡孜缓愣ㄊ芾郏颊咧校G榭鱿挛挥的蛴的蚍⑸诤虾笮纬蒔—融合基因。在不同的上海第二医科大学博士学位论文
关键词:急性白血病;基因;.Ⅳ泞一段”的变异型甊患者出现临床原发耐药的现诱导分化治疗作用的理论。最后,我们发现所有的寻找到可能的断裂点丛集区,近一一步说明了虻牡之间插入一些多变的序列或缺失~些核苷酸。为了进一步阐明;┪恍号“甜”,所以断裂的虻诹磐庀宰佑胝庑耙匿”的编码序列融合后可以维持融合转录本的开放阅读框架象,在这些病例中,由于“插入片段”的存在使融合受体与转录共抑制物蛋白结合的亲合力发生显著的改变,从了通过调变￡蛋白与核共抑制物的亲合力来发挥虻牡诹磐庀宰樱⒃诙狭训腜与的分子机制,我们测定了娜ɑ蜃樾蛄小7⑾炙变异型甊融合基因转录本中的“插入片段”都来自4送猓徊降难芯糠⑾植糠志哂薪铣ぁ安迦肫而使这些患者用药理浓度的治疗无效。这进一步证实因断裂点都位于该基因的第二号内含子中,并在该内含子中二号内含子序列可能在姆⒉』浦衅鹬匾W饔谩基因;猂院基因;转录调控;全反式维甲酸上海第二医科火学博士学位论文
,籷瑆—琍猺甒;,瑃,瓾甅—痮.Ⅳ【,籋/甌,—月酷遥珻琲.,,,—,一痯甀,,上海第二医科大学博士学位论文
————,一塑塑三堕型兰竖主兰焦堡兰甌,籔,;籺瑃;瑆,琣一,一瑃猘瓼—痮,甌“’’,疘.,瑃“痗—。..甌甀
———圭堡笙三垦翌奎兰堕主兰竺堡苎