[硕士论文]表达FasL基因Hela细胞诱导淋巴细胞凋亡的研究.pdf

上海第二医科大学
博士后学位论文
表达FasL基因Hela细胞诱导淋巴细胞凋亡的研究
姓名:陈炜
申请学位级别:博士后
专业:整形外科
指导教师:曹谊林
20040801
内容摘要目的τ肍蜃H揪哂猩掀は赴匦缘腍赴教諪虻谋达对诱导淋巴细胞凋亡的作用。为解决同种异体组织工程化皮肤的免疫排斥问题提供方法;将一质粒转化大肠杆菌,抽提纯化的一质粒用限制性内切酶,酶切,琼脂糖凝胶电泳得到笮〉哪康奶醮T谧贤獾葡切割回收目的条带并抽提纯化得到基因,用,;酶连接,。,筛选;筛选后的细胞经过免疫细胞化学法。—ê螅笛樽楹投哉兆橛胪忠焯辶馨拖赴才养后,进行了淋巴细胞染色体狭巡舛ā⒘馨鸵蜃覴狿、淋巴细胞计数、单结果:与表达基因的细胞共培养的淋巴细胞染色质狭眩缬旧哉兆槲醇坏ハ盍馨拖赴旌鲜匝槲1泶颋基因的细胞的淋巴细胞刺激指数较对照组转染空白质粒的细胞下调,仅达到对照组刺激指数的.%;淋巴因子的—峁笛樽橄允綢,猋,泶锏陀诙哉兆椋琁R籰泶镌蛭J笛樽楦哂诙哉兆椋皇笛樽榈牧馨拖赴棵飨主要结论:表达基因的细胞可以诱导馨拖赴蛲觯捎肍因转染细胞构建的同种异体组织工程化上皮移植后的有可能基因免疫反应下调,使其获得免疫尉受。将继续优化转染小鼠的上皮细胞的条件,更深入的研究基因在异体组织工程化上皮移植后诱导免疫耐受的机理和作用。一条研究途径。项淋巴细胞混合试验等实验,检测了基因对诱导淋巴细胞凋亡的作用。呈现梯形电泳图谱减少。丶蔧基因基因转染细胞凋亡赴上海第二医科大学博士后研究报告
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前言皮肤是人体最大的器官,同时它又是起着重要的屏障和保护作用的最外表器官,因此极易受到损伤并具有很强的免疫原性。目前外伤、烧伤、肿瘤组织切除后的大面积皮肤缺损,常用的治疗方法是自体皮肤移植、异体皮肤移植、组织工程化皮肤移植。自体皮肤移植在收缩性、色泽、耐磨性、皮肤附属器、感觉等方面都是疗效最好的,但是蛊体皮肤移植往往在修复了旧创异体皮肤移植经常应用于大面积烧伤时刨面的覆盖,它减少了创面的渗出和感染,提高了患者的救治率,满足了急救所需。由于皮肤具有很强的免疫原性,超低温冷冻法虽然使其免疫原性有所减低并为同种异体皮肤的大量保存提供了保证,但是皮获作为性排斥反应,一般方法抑制免疫排斥的发生同时又有易被交叉感染其他疾病的缺陷。为了解决上述两种方法存在的问题,科学家们进行了长时间的研究,希望能找到集两种方法有点于一身的治疗方法。年虶成功地进行了表皮的发展,已经开发研制了很多含有自体上皮细胞的组织工程化皮肤,并已在许多国家逐渐应用于供皮区及大面积缺损的临床治疗从而日益引起人们的关注。但是由于自体组织工程化上皮存在的培养时间较长、广泛大面积缺损时种子细胞来源不足等问题,制约了自体组织工程化上皮在治疗大面积皮肤损伤及急症治疗中的应用,也阻碍了其随着“脑死亡”等医学伦理问题的解决,大最同种异体皮肤的捐献解决皮肤种子细胞来源问题,为同种异体皮肤的产品化提供了物质基础。由于同种异体组织工程化皮肽克服了自体组织工程化皮肤不能应用于大面积皮肤缺损和急症治疗的问题,并以产业化因而有着广阔的应用前景。同种异体皮肤虽然在种子细胞收集过程中,去除了在免疫反应中起着重要的抗原提呈作用的朗罕氏细胞、树突状细胞,但是上皮细胞仍保留着特异性抗原,移植后经过一段时间同种异体组织工程化皮肤仍将被排斥,因此寻找诱导同种异体组织工程化皮肤移植后的免疫耐受途径,使之成为广泛应用的产在皮肤同种异体移植的过程中,移植物的识别和排斥包括效应细胞和调节因子在面的同时造成供皮区新创面瘢痕的增生,从而影响供皮区的功能或美观;同种熘人体表面的屏障系统仍具有很强的免疫原性,通常在移植后两周左右便发生典型的急的体外培养,为治疗大面积的皮肤缺损开创了新途径⋯。近年来,随着组织工程技术产、化的进程。品成为很多研究者的梦想。上海第二医辩大学博士后研究报告
内的多种细胞间的复杂的过程。移植后免疫系统被激活后,浸润移植物的馨拖赴捕捉异体抗原和细胞,通过淋巴引流而产生致敏,从而启动免疫反应”’。由于在同种异体免疫反应中,赴鹱欧浅9丶淖饔茫虼思跎賂细胞的浸润,阻断免疫反应的启动,是诱导移植物免疫耐受的重要途径之一。上世纪年代后期关于细胞凋亡理论的问世以及对能够诱导细胞凋亡的其配体的深入研究,为解决同种异体组织工程化皮肤移植后的免疫耐受提供了用,同种异体移植物移植后能在许多水平引发细胞凋亡。现在推测有两种情况:一种情况是移植物被移植后,激活了受体的免疫系统,使赴罨泶颋浦参锉达的肫渑浣拥贾乱浦参锵赴牡蛲觯浦财鞴俚南赴