微量凯氏定氮法.doc

(Kjeldahl)定氮法常用于测定天然有机物(如蛋白质,核酸及氮基酸等)的含氮量。含氮有机物与浓硫酸共热时,其中的碳、氢被分别氧化成CO2和H2O,氮则转变为氨,并进一步与硫酸作用生成硫酸铵,是为“消化”。该反应进行得比较缓慢,通常需要加入硫酸钾/硫酸钠以提高反应的沸点,并加入硫酸铜作为催化剂促进反应的进行。以甘氨酸为例,其消化过程可表示如下:NH2浓碱可使消化液中的硫酸铵分解,游离出氨,可借助水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定量及一定浓度的硼酸溶液中,硼酸吸收氨后,氨与溶液中的氢离子结合,生成铵离子,使溶液中的氢离子浓度降低;然后用标准无机酸滴定,直至恢复溶液中原来的氢离子浓度为止,最后根据所用标准酸的当量数(相当于待测物中氨的当量数)即可计算出待测样品中的氮含量。滴定时用甲烯蓝和***红混合指示剂,~,将NH4H2BO3的蓝/绿色滴至原来H3BO3的蓝紫色即为终点。~,相对误差应小于2%。材料、试剂与器具材料鱼肉、(化学纯)%氢氧化钠(分析纯)-硫酸铜混合物:硫酸钾与硫酸铜以3:1(W/W):%%***红乙醇溶液200ml混合配成(贮于棕色瓶备用,这种指示剂酸性时为紫色,碱性时为绿色,变色范围窄且灵敏)-指示剂混合液:2%硼酸溶液100ml,滴加混合指示剂贮备液,摇匀后溶液呈现紫红色即可(约加1ml左右混合指示剂)。器具凯氏烧瓶消化架吸量管(1ml,2ml)量筒(10ml)凯氏定氮蒸馏装置微量滴定管(3ml,5ml,)锥形瓶(50~100ml)容量瓶(50ml)操作步骤㈠消化称取适量鱼肉样品加入50ml凯氏烧瓶(注意勿沾于瓶口或瓶颈上)。加入硫酸钾-,浓硫酸3ml,小瓷片两粒,摇匀。将烧瓶约60度角固定在铁架上,每个瓶口放一小漏斗,在通风厨内的电炉上消化。在消化开始时,应控制火力,不要使沸液冲到瓶颈。待瓶内水汽蒸完,硫酸开始分解并放出SO2白烟后,适当加强火力,继续消化,直至消化液呈透明蓝绿色为止。消化完毕,待烧瓶内容物冷却后,加蒸馏水10ml(注意慢加,边加边摇)。冷却后将瓶内容物转入50ml容量瓶,并用蒸馏水洗烧瓶数次,溶液一并倒入容量瓶,最后定容至刻度摇匀,做上记号备用。㈡蒸馏1、仪器的洗涤:仪器应先经一般洗涤,再经水蒸气洗涤。蒸馏器有几种,应用前需熟悉其使用方法。使用方法如下:图1-1凯氏微量定氮蒸馏装置开放自来水龙头,使水E进入G,从K管流出(水不宜开得过大以免水从G管溢出)。开放P3,使水进入A室,漏斗D中加蒸馏水约10ml入B室。用拇指将管口按紧,同时开放P1,则B室中的水先从Y型管口冲出,随后A室中水经K管流出,一般情况下如此重复洗涤两次即可。若蒸馏器内有氨存在,则应加入蒸馏水后,不加样品蒸馏一次方可使用(可用pH试纸检查)。A为蒸气发生室,P3为其开关,P1为出水开关,B为蒸馏室,与出气管M相接,M管插入盛有定量硼酸液的锥形瓶,B室内有Y型管,一端与A室相通,另一端经P4与漏斗D相连,可经此将样品及