纤维素酶活性测定方法的影响因素研究.pdf

纤维素酶活性测定方法的影响因素研究

(生命科学学院生物技术专业黄杰璋)
(学号 1999302248)

内容提要:在大量实验的基础上,从固体发酵产酶的各种参数、活力测定用温度、底物
影响等方面,探讨了用 CMC(羧***纤维素酶酶活力)及 FPA(滤纸酶活力) [1]测定纤维素酶活
力的方法。本文针对测定过程中出现的一些问题,作出了一些探索性的研究讨论。并给出详
细的测试过程及酶活力计算式,本测试方法对纤维素工业应用中,对控制生产过程及产品质
量具有一定的实际指导意义。
关键词:纤维素酶,里氏木霉,CMCase,Fpase,酶活力,磁场
教师点评:论文对用羧***纤维素(CMC)及滤纸为底物用 DNS 法测定纤维素酶活性
的方法进行了探讨,研究了温度及滤纸酶活(FPA)测定时不同分析过程的具体操作程序的
影响,发现在 FPA 法中滤纸是否在测定介质中除去及最后测定液是否离心,会造成测定值
有 10%的测定误差。该结果对建立一个标准的纤维素酶活测定方法有重要的参考价值。(点
评教师:余少文,副教授)

1. 前言
纤维素分子是由许多吡喃型的 D—葡萄糖残基以 1,4—β—贰键相联结而成的多糖,是
一种高分子化合物。在纤维素之间存在着氢键,通过氢键的缔合作用,纤维素链形成了纤维
素束[2]。
纤维素酶是一组能够降解纤维素生成葡萄糖的酶的总称,在食品、饲料、医药、纺织、
洗涤剂和造纸等众多的工业领域具有广泛的应用价值。
固体发酵法是近年来国内外研究的较多的一种酶发酵方法,它与液体深层发酵方法相
比,具有酶产量高、省电、污染问题少、管理比较容易、酶抽提液浓度可任意调节、后处理
简单等优点。
. 纤维素酶的概述
. 纤维素酶的组分:
一个完整的纤维素酶系,通常由作用方式不同而能相互协同催化水解纤维素的三类酶组
成,即(1) 内切葡聚糖酶(endo— 1,4—β— D— glucanase,,简称 EG、Cx)。
这类酶作用于纤维素分子内部的非结晶区,随机水解β— 1,4—糖苷键,将长链纤维素分子
截短,产生大量带非还原性末端的小分子纤维素。(2)外切葡萄糖苷酶(exo— 1,4—β— D—
glucanase,,C1),又称纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase,简称 CBH)。这
类酶作用于纤维素线状分子末端,水解β— 1,4 糖苷键, 每次切下一个纤维二糖分子。(3)
β—葡萄糖苷酶(β— glucosidase,,简称 BG),这类酶将纤维二糖水解成葡萄
糖分子。
. 纤维素酶的性质:
一般纤维素霉的分子量在 45000-75000 之间,最适作用温度在 50 度左右,最适 ph4-
5 之间,由不同的产生菌种所产的纤维素酶在分子量、含糖量、等电点、最适 ph、最适温度
等方面又有所不同,有的甚至相差较大,而且纤维素酶的各组分大多数是糖蛋白,含糖的比
例很不同,糖和蛋白之间的结合方式也不同,有的是通过共价键连接,有的则是可解离的复
合物。
纤维素酶的作用方式:首先由内切葡聚糖酶作用于微纤维的非结晶区,使其露出许多末
1
端供外切型酶