转染A549细胞总RNA的树突状细胞疫苗抗肿瘤效应的体外的研究.pdf

安徽医科大学硕士学位论文
转染 A549 细胞总 RNA 的树突状细胞疫苗
抗肿瘤效应的体外研究

摘要

目的:1)明确从人重组的粒细胞集落刺激因子(human bination granulocyte
colony stimulating factor,rhG-CSF)动员的外周血干细胞采集物中分离诱导树突状
细胞(dendritic cells,DCs)的可行性。2)探讨利用脂质体包裹人肺腺癌细胞株
A549 总 RNA 转染 DCs 来制备疫苗的可行性及实验条件的优化。3)观察 DCs 疫苗在
体外诱导特异性抗肿瘤免疫反应的能力。

方法:2008 年 8 月—2009 年 8 月间本院外周血干细胞移植术供者按照常规方法皮
下注射 10 μg·kg-1·d-1,连续 5 天,在第 5 天动员达到高峰时采集外周血干细胞。
收集 15 例采集物。利用密度梯度离心法从外周富集血中分离出单个核细胞,贴壁
获得单核细胞,并进一步诱导为 DCs。同时利用提取的 A549 细胞总 RNA 转染 DCs
来制备疫苗,并与 T 细胞混合培养,扩增细胞毒性 T 淋巴细胞(cytotoxic T
lymphocytes, CTLs);实验分为转染 A549 细胞总 RNA 的 DCs 组、未转染 DCs 组和转
染空脂质体 DCs 组,分别以流式细胞术(FCM)鉴定 DCs 表型、酶联免疫吸附法
(ELISA)检测 IL-12、IFN-γ分泌水平、3H-TdR 掺入检测 T 细胞增殖能力及乳酸
脱氢酶(LDH)释放法测定杀伤肿瘤活性并比较各组差异。

结果:1)转染总 RNA 组 DCs 表面 CD40、CD80、CD83、HLA-DR 的表达较未转染组
DCs 和转染空脂质体组 DCs 均有升高,CD40 在三组的表达率分别为:(±)
%、(±)%和(±)%;CD80 在三组的表达率分别为:(
±)%、(±)%和(±)%;CD83 在三组的表达率分别为:
(±)%、(±)%和(±)%;HLA-DR 在三组的表达
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率分别为:(±)%、(±)%和(±)%,差异有统
计学意义(P<);2)转染总 RNA 组 DCs 的 IL-12 和 IFN-γ分泌水平较未转染
组及转染空脂质体组明显升高(P<),三组 IL-12 分别为:(±)
pg/ml、(±)pg/ml 和(±)pg/ml;三组 IFN-γ分别为:
(±)pg/ml、(±)pg/ml 和(±) pg/ml;3)3H-TdR
掺入试验所得的 cpm 值,转染 A549 总 RNA 的 DCs 组:7 437±720,未转染 DCs 组:
2 207±296,转染空脂质体的 DCs 组:2 443±314,阳性对照组为:16 739±91,
差异有统计学意义(P<);4)LDH 释放法可见转染 A549 总 RNA 的 DCs 组的特
异性杀瘤活性(±)%,明显高于未转染组(±)%和转染空
脂质体组(±)%,差异具有统计学意义(P<)。

结论:1)利用密度梯度离心法可以从经 rhG-CSF 动员的外周血干细胞采集物中分
离诱导出具备典型形态和免疫表型的 DCs。2)可采用脂质体包裹 A549 总 RNA 来
转染 DCs 来制备肿瘤疫苗。3)DCs 疫苗在体外具有较强的刺激 T 细胞增殖能力和
杀瘤活性。

关键词人肺腺癌细胞(A549) 树突状细胞(DCs) RNA 转染抗肿瘤疫苗肿
瘤免疫




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Anti-tumor effect of dendritic cell ines transfected with
total RNA of A549 cells in vitro study

Abstract
Objectives: 1) To make definite the practicability of sorting and cultivating DCs
(dendritic cells) from rhG-CSF(human b