穴位电针对面神经核中神经型钙粘附分子和胎盘型钙粘附分子表达的影响.pdf

????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????432致谢???????????????????????(综述)??45万方数据四川医科大学硕士学位论文穴位电针对面神经核中神经型钙粘附分子与胎盘型钙粘附分子表达的影响摘要目的:本实验通过制作面神经上颊支压榨损伤动物模型,以穴位电针作为干预手段,采用免疫组织化学SP法和实时荧光定量多聚核苷酸链式反应法(Real-timeqPCR)-cad的半定量与定量的表达情况,。方法:共选用成年健康的新西兰家兔104只。其中免疫组织化学法检测组,设立正常对照组、手术对照组、针刺治疗组三个实验组;正常对照组选新西兰家兔4只,手术对照组(24只)、针刺治疗组(24只)分别按术后1天、4天、7天、14天、21天、28天六个时间点,每个时间点选4只,共52只。实时定量PCR法检测组,也按上述分组方法,选用52只新西兰家兔。正常对照组不作任何处理,直接取含面神经核的脑桥中下部组织进行免疫组化和实时定量PCR检测。手术对照组、针刺治疗组制作右侧面神经上颊支压榨损伤动物模型,损伤程度符合SunderlandIV度。术后两小时,针刺治疗组电针刺激翳风、颧缪、颊车、地仓、阳白、四白及合谷穴,每天1次,每次30分钟;而手术对照组术后不做处理。在术后按六个不同时间点经麻醉、经心灌注、预固定等方法取家兔脑桥中下部脑组织,通过固定、漂洗、脱水、包埋制成石蜡切片,,光镜下计数两种钙粘附分子标记阳性的细胞数,。,模型制作完成后,术后按六个不同时间点,耳缘静脉空气栓塞,在冰台上取脑桥上缘以下到脑桥下缘3mm以上的脑组织,液氮冻存,.80℃冰箱内保存。经总RNA提取、PCR引物的制备、逆转录反应、对cDNA进行扩增等步骤,,。结果:免疫组织化学SP法检测组:、。术后1天手术对照组出现了两种粘附分子标记的阳性细胞(N--、P-±),阳性细胞DAB染色后呈棕黄色,表达在面神经核运动神经元角细胞胞浆中;针刺治疗组同一时间段,两种分子标记的阳性细胞数明显增多(±、±)针刺治疗组丽种分子的阳性细胞数比手术对照组高,差异有显著统计学意义(p<);术后4天手术对照组两种分子均有阳性表达(±、±),针刺治疗组(±、±)两种分子的阳性细胞数及表达强度均达到高峰,针刺治疗组与手术对照组比较,差异具有显著统计学意义(p<);术后7天手术对照组(N-+、P-+),针刺治疗组两种分子的万方数据四川I医科大学硕士学位论文表达仍维持在高表达水平(N-±、P--569),针刺治疗组与手术对照组比较差异具有显著统计学意义(p<);术后第14天,手术对照组P-cad(±)的阳性表达达到最高峰,针刺组两种分子的阳性表达有下降趋势N—cad(±)、(±),针灸治疗组与手术对照组比较差异具有显著统计学意义(p<);术后第21天,手术对照组N—cad无阳性表达、P-cad(±),(-4-)、P-cad(+),针刺治疗组与手术对照组比较差异具有显著统计学意