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液体一级母种的制备马铃薯20% % % % % KH 2PO 41%MgSO 4·7H % VB % 按上述配制母种液体培养基,然后分装于 500ml 的三角瓶中,每瓶装液 200ml ,用封口膜封口。在高压灭菌锅 121 ℃下灭菌 30min 。冷却后接斜面试管菌种,在超净工作台上每瓶接 3 大小的三块菌种到三角瓶中。将接种后的三角瓶置于 26℃恒温箱内培养两天,然后震荡培养(转速 140r/min 温度 26℃), 当接种后从第三天开始要经常检查是否有杂菌污染。瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养,制的液体一级菌种。不同液体培养基配方的的制备葡萄糖 3% 玉米粉 5% 酵母粉 % KH 2PO % MgSO % VB % 木屑 0% 木屑 % 木屑 1% 木屑 % 1 —————— 2—————— 3—————— 4——————按上述配制培养基每个配方处理重复 3 次,然后分装于 500ml 的三角瓶中,每瓶装液 200ml ,用封口膜封口。在高压灭菌锅 121 ℃下灭菌 30min 。冷却后每一瓶中分别接种液体一级菌种 15ml ,将接种后的三角瓶置于 26℃恒温培养箱(转速 140r/min 温度 26℃),瓶内产生细小而稠密的菌丝球时终止培养。同理,按上述操作,将木屑分别改为杨树木屑和石榴树木屑,其余步骤相同。纤维素酶酶活测定: 试剂:纤维素酶 乙酸-乙酸钠缓冲液 %CMC 蒸馏水 DNS 标准葡萄糖液 1mg/ml 配制试剂: 1·DNS 显色液:称取 10gDNS ,溶入蒸馏水中,加入 20g 分析纯 NaOH ,200g 酒石酸钾那,加水500ml ,升温溶解后,加入重蒸酚 2g, 无水 Na2SO ,加热搅拌,待全容后冷却,定容至 1000ml 。存于棕色瓶中,放置一周后使用。 2·标准葡萄糖溶液:称取 500 干燥至恒重的葡萄糖 100mg ,溶解后定容至 100ml 。步骤:1·空白管:取 1ml 蒸馏水沸水浴 5min 冷却后加 %CMC 2·样品管:取三只试管分别加入 %CMC ,1ml 酶液,混匀。与空白管同时置于 50℃水浴锅中水浴 30min 取出,沸水浴 10min ,冷却后加入 3mlDNS 显色液,再沸水浴 10min 冷却后定容至 25ml 混匀,与标准曲线同时在 550nm 下测 OD值。 3·标准曲线绘制:取六支试管分别加入葡萄糖 0、 、 、 、 、 ,各管加蒸馏水共 1ml ,再分别加入去离子水 1ml ,在分别加入 DNS3ml ,沸水浴 10min ,冷却后定容至 25ml ,550nm 下测 OD值。计算:三个样品管取平均值, 纤维素酶活力( u/g )=r×Df×2×1000/V 式中: r:通过 OD550nm 值从标准曲线上查得与标准葡萄糖溶液相对应的浓度( ug/ml ) V:试验时移取得酶液的体积 Df:稀释倍数(注:酶活力值保留 3位) 表一 123456 葡萄糖标(ml) 蒸馏水(ml) 0