HPV临床常用检测方法.doc

由于HPV不能在体外细胞培养,故不能用简便的血清血检测进行HPV的诊断与分型。临床上用于检测HPV的方法包括细胞学方法、免疫组化、原位杂交、斑点杂交、核酸印迹与PCR等,其中以PCR方法的敏感性最高,就是目前应用最多感染的HPV型别、含量、持续时间决定病变的发展与预后,就是进行HPV检测的主要内容。目前主要就是通过应用分子生物学方法进行HPVDNA的检测。1、现有的HPV实验室主要检测手段:①聚合酶链反应(PCR,PolymeraseChainReaction):扩增位于两段已知序列之间的DN***断的方法。该法有较高的敏感度,可进行HPV分型,缺点就是对实验室环境要求较高,容易发生样本间的交叉污染,从而导致假阳性率高。②核酸杂交检测有较好的特异性与敏感度,还可以进行HPVDNA的分型,各种核酸杂交检测方法有一定的优缺点。A核酸印迹原位杂交适用于HPV分型与HPVDNA分子量鉴定,虽然灵敏度高,但因操作复杂,需要新鲜组织标本,不便在临床上大规模使用。B斑点印迹其敏感度与特异性均低于核酸印迹原位杂交法,虽然经济实用,但实验过程存在有放射性污染,就是环保所不能轻视的问题。C原位杂交(insituhybridization,一种核酸杂交技术,可用来测定基因或特定核苷酸序列在核酸分子的所在部位,检测重组体DNA)通过非放射性探针对石蜡组织进行检测,能作定位检测,假阳性率低,但灵敏度不高,大大降低了临床使用价值。D杂交捕获法(HybridCapture) 杂交捕获试验就是利用化学发光对抗体捕获的信号加以放大。首先使DNA双链释放并分解成为可以杂交的核苷酸单链,DNA单链与RNA组合探针结合为RNA-DNA杂合体,特异性抗体将RNA-DNA杂合体捕获,偶联有碱性磷酸酶的第二抗体与RNA-DNA杂合体结合,碱性磷酸酶使酶底物发光,根据光的强弱可确定碱性磷酸酶的含量,从而确定RNA-DNA杂合体的含量。能检测13种高危型HPV,包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68。 各种检测方法的比较 各种检测方法的比较方法学灵敏度特异性技术特点细胞学(Cytology)低低操作容易,成本较低,准确度较差斑点印迹(Dotblot)中中有一定放射性核酸印迹原位杂交(southernblot hybridization)高高标准、麻烦,不宜大规模使用原位杂交(InSituhybridization)高中蜡块组织包埋内检测HPV杂交捕获(HC、HC2)高中无放射性,易使用,高、低危型间有交叉反应,且不能分型普通多聚酶链反应(PCR)很高中取材容易,但目前已应用试剂的只能检测少数单一型别,如6、11、18等,且由于技术上的问题存在假阳性   2、最新推出的HPV的实验室检测技术高灵敏度高危型HPV分型多色荧光实时PCR试剂:为欧洲著名分子生物学研究机构专门针对宫颈癌筛查而全新设计的高危型HPV分型多色荧光实时PCR检测试剂,可同时检测高危型中最主要的16、18、31/33、35/45型。了解宫颈疾病人乳头状瘤病毒(HPV)感染患者中HPV亚型分布情况及高危型HPV的年龄分布。方法采用专利Invader酶切信号放***,利用CervistaHPVHRCervisat核酸杂交基因分型试剂检测宫颈脱