酶的沉淀分离.ppt

蛋白酶分离纯化技术蛋白酶分离纯化技术沉淀分离沉淀分离徐杰徐杰 200 200 8 8 第五节第五节沉淀分离沉淀分离一、盐析沉淀法一、盐析沉淀法?盐溶的定义和原理一般在低盐浓度的情况下,蛋白酶的溶解度随盐浓度的升高而增加原理盐正负离子使电荷的相互排斥作用増强;同时离子的存在使溶液中水之间的作用加大。盐浓度提高到一定浓度后,蛋白酶盐浓度提高到一定浓度后,蛋白酶的溶解度随盐浓度的升高而下降的溶解度随盐浓度的升高而下降原理?盐离解为正负离子,中和了蛋白的电荷,使电荷的相互排斥作用消失?水化膜破坏, 蛋白原来分布在蛋白内部的疏水性氨基酸暴露在表面,疏水性氨基酸有相互聚集在一起?盐析的定义和原理盐析的定义和原理?盐析的盐析的特点※可浓缩蛋白※可分离蛋白,不同蛋白沉淀所需的盐浓度不同不同蛋白的疏水性氨基酸的数量和种类有所不同二二影响蛋白溶解度的因素影响蛋白溶解度的因素??S: S:蛋白酶在离子强度为蛋白酶在离子强度为 I I时的溶解度时的溶解度( (g/L) g/L) ??S。: 蛋白酶在离子强度为 0时( 即纯溶剂中)的溶解度( g/L) ?? Ks —盐析常数?? I —离子强度与蛋白特性、溶液温度、与蛋白特性、溶液温度、 pH pH、盐的特性和浓度有关、盐的特性和浓度有关?S S。。在一定的温度和在一定的温度和 pH pH 下为常数下为常数?β主要决定于蛋白酶的性质,也与温度和 pH 值有关。温度和 pH 值一定, β为常数? Ks(盐析常数) 和盐的离子价数成正比,与离子半径和溶液的介电常数成反比;也与蛋白质性质有关,和溶液温度和酸碱度等有关。?离子强度离子强度※对于某一蛋白酶,在温度和 pH 等盐析条件已确定(β确定) ,所用的盐确定(即Ks 确定) 之后,蛋白酶的溶解度决定于溶液中的离子强度※离子强度是指溶液中离子强弱的程度,与离子浓度和离子价数有关。三三盐析中通常采用的盐盐析中通常采用的盐?强酸弱碱盐,如硫酸铵等强酸弱碱盐,如硫酸铵等( (最常用最常用) ) 优点优点: :??不影响酶的活性??硫酸铵在水中的溶解度大而温度系数小(在25℃时,溶解度为 767 g/L ;在0℃时,溶解度为 697 g/L)。??分离效果好??价廉易得缺点缺点??硫酸铵进行盐析时缓冲能力差(溶液变酸) ??铵离子会干扰蛋白质测定