实验八 蔗糖酶Km测定-课件(PPT演示稿).ppt

酶的动力学性质分析,是酶学研究的重要方面。测定 K m和V max ,特别是测定 K m,是酶学研究的基本内容之一, K m是酶的一个基本的特性常数,它包含着酶与底物结合和解离的性质,特别是同一种酶能够作用于几种不同的底物时,米氏常数 K m往往可以反映出酶与各种底物的亲和力强弱, K m值越大,说明酶与底物的亲和力越弱,反之, K m值越小,酶与底物的亲和力越强。 2. 底物浓度对酶活性的影响实验原理? Michaelis-Menten ics 实验原理实验原理 Lineweaver -Burk ics 实验原理(双倒数作图法) 蔗糖酶的准备?酶粉溶于 10ml — 20ml 蒸馏水,离心 10,000rpm 离心 10 分钟后去掉不溶物。酶活力预试 H 2O沸水浴煮 5min 溶液 ml 二硝基水杨酸试剂 25℃水浴 5min 稀释后的蔗糖酶溶液 ml 二硝基水杨酸试剂 25℃水浴中保温 3min 醋酸缓冲液 ml 10% 蔗糖溶液 ml 2(对照) 1 取出后经自来水冷却 3min ,以标准曲线的“0”管调零点, 于 520nm 处测光密度值。测得的 A 520 nm 值在 - 之间。底物浓度与酶促反应速度 H 2O混匀,沸水浴 5min ,自来水冷却 3min ,以标准曲线的”0”管调 0, 520nm 测 OD 值。加入 稀释后的酶液 25℃准确反应 5min ,迅速加入 二硝基水杨酸溶液,加 的 NaOH 溶液 3分钟预热 25℃ 醋酸缓冲液, ml 10% 蔗糖溶液 ml 7