生化分离技术复习部分题答案.pdf

一、名词解释: 1 、梯度洗脱:在同一个分析周期中,按一定程度不断改变流动相的浓度配比,称为梯度洗脱。从而可以使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子 k 达到良好的分离目的。或者答流动相由几种不同极性的溶剂组成,通过改变流动相中各溶剂组成的比例改变流动相的极性, 使每个流出的组分都有合适的容量因子 k' , 并使样品种的所有组分可在最短时间内实现最佳分离。(可在离子交换层析中查) 。 2 、分辨率:是相邻两个峰的分开程度,用相邻两峰对应的洗脱体积之差比上两个半峰宽之和的平均值表示。 3 、亲和层析:利用生物分子与其配体间特异性的、可逆性的亲和结合作用而对样品进行分离,配体被固定在载体上,特异性结合经过的与其亲和性的生物分子的一种层析技术。 4 、等电聚焦:使电泳的介质中形成一个连续的、稳定并有一定范围的线性 pH 梯度,电泳时蛋白质等待分离的***分子可以在这种 pH 梯度中迁移, 直到迁移聚集于与其等电点( pI ) 相同的区域,从而形成一种分辨率极高的电泳聚焦效应。 5 、盐析:增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低,以致使电解质类物质从溶液里沉淀出来的一种作用现象。附资料: 它是蛋白质分离纯化中经常使用的方法, 最常用的中性盐有硫酸铵、硫酸钠和***化钠等。 6 、保留时间 tR : 从开始进样至柱出口处被测组分出现浓度最大值时所需的时间, 称为保留时间。层析分离技术的一个参数。 7 、双向电泳:等电聚焦电泳和 SDS-PAGE 的组合的电泳方法,即先进行第一向水平电泳——等电聚焦电泳(按照 pI 分离) ,然后再进行第二向垂直电泳—— SDS-PAGE (按照分子大小) ,经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。 8 、密度梯度离心:在呈密度梯度的惰性介质中以一定的离心力进行离心,让各组分会依其密度分布在梯度中与其自身密度相同的液层中的依密度而分离的离心法。附资料: 密度梯度可以离心前预先制备( 如叠加不同浓度蔗糖、甘油) 或在离心中自然形成( 如使用***化铯时) 。可用于分析型或制备型的离心分离。通常分为差速区带离心和等密度离心两种方式。二、填空题(要点) : 2 、最常用的几种蛋白质的沉淀方法: 盐析法( 中性盐沉淀) 、有机溶剂沉淀、选择性沉淀( 热变性沉淀和酸碱变性沉淀) 、等电点沉淀、有机聚合物沉淀、聚电解质沉淀法、金属离子沉淀法。 4 、细胞破碎的方法: 1) 物理:高压匀浆法、珠磨法、超声波破碎法、渗透压冲击法; 2) 化学:外加酶法、酶自溶法、化学试剂法。 5 、聚丙烯酰***凝胶单体: ( 一些资料) 聚丙烯酰***凝胶电泳简称为 PAGE ( Polyacrylamide gel electrophoresis ) 聚丙烯酰氨凝胶电泳, 是以聚丙烯酰***凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰***凝胶由单体丙烯酰***和甲叉双丙烯酰***聚合而成, 聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过硫酸铵( AP )为催化剂,以四***乙二***( TEMED )为加速剂。在聚合过程中, TEMED 催化过硫酸铵产生自由基,后者引发丙烯酰***单体聚合, 同时甲叉双丙烯酰***与丙烯酰***链间产生甲叉键交联, 从而形成三维网状结构。 6 、 DEAE- 纤维素吸附酶和蛋白质时常用 pH 为 7