液相色谱法的使用测试课程.ppt

液相色谱法的使用测试课程
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类 型
吸附色谱
吸附能，氢键
异构体分离、族分离，制备
分配色谱
疏水分配作用
各种有机化合物的分离、分析与制备
排阻色谱
溶质分子大小
高分子分离，分子量及其分布的测定
离子交换色谱
库仑力
无机离子、有机离子分析
手性色谱
立体效应
手性异构体分离，药物纯化
主要分离机理
主要分析对象或应用领域
亲和色谱
生化特异亲和力
蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析
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高压：载液压力150~300kg/cm2
高速：载液流速1~10ml/min
高灵敏：Uv(10-9g)、Fl (10-11g)
高效：柱效106、3万塔板数/m
特点：高压、高效、高速
高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分 离分析方法。
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二、高效液相色谱仪
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检测器
高压输液泵
高压输液泵
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
数据处理系统
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贮液器
高压泵
梯度洗提装置
馏份收集器
记录仪
检测器
压力表
HPLC仪流程图
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1、输液系统
(1) 高压输液泵
高压输液泵
在线脱气装置
高压输液泵是液相色谱仪的关键部件，其作用是将流动相以稳定的流速或压力输送到色谱系统。
对于带在线脱气装置的色谱仪，流动相先经过脱气装置再输送到色谱柱。输液泵的稳定性直接关系到分析结果的重复性和准确性。
基本要求：流量准确可调。对于一般的分析，-2mL/min，输液泵的最大流量一般为5-10mL/min。输液泵的流量控制精度通常要求小于±%。输液泵必须能精确地调节流动相流量，这可以通过电子线路调节电机转速或冲程长短来实现。流量的测定通常采用热脉冲流量计。
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主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（<10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。
应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性
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输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。
对液相色谱分析而言，输液泵的流量稳定性更为重要，因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化，而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此，恒流泵的应用更广泛。
输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。
机械泵中又有螺旋传动注射泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。
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几种高压输液泵的性能比较
名 称
恒流或恒压
脉冲
更换流动相
梯度洗脱
再循环
价格
气动放大泵
恒压
无
不方便
需两台泵
不可
高
螺旋传动注射泵
恒流
无
不方便
需两台泵
不可
中等
单活塞往复泵
恒流
有
方便
可
可
较低
双活塞往复泵
恒流
小
方便
可
可
高
隔膜往复泵
恒流
有
方便
可
可
中等
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