移植免疫及免疫学检测.ppt

移植免疫及免疫学检测
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移植（transplantation）:将健康细胞、组织或器
官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、用以
替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的现代
医疗手段。
（indirect path）:通过受者体内的抗原提呈细胞对具有同种异基因HLA-Ⅰ、-Ⅱ类分子的移植物实质细胞的识别。无论是供者还是受者，其抗原提呈细胞提供的IL-1、IL-6等刺激信号，有助于触发淋巴细胞的活化
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同种移植排斥反应的发生机制
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慢性排斥反应的介导因素：
T细胞、巨噬细胞等介导的迟发型超敏反应等免疫损伤。
B细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏血管内皮细胞。
急性排斥反应反复发作所导致的移植物组织退行性变，此与细胞
和体液免疫均有关系。
非免疫相关因素，诸如局部缺血、再灌注损伤、微生物感染等。
受者患有高血压或糖尿病也可促使慢性排斥反应的发生
临床特征：
对免疫抑制疗法不敏感
无特异性治疗方法，
最终需要重新进行器官移植
3. 慢性排斥反应
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定义：在骨髓移植时，供者骨髓中的免疫细胞启动以受者细胞为靶抗原的免疫应答反应，引起攻击受者的移植物抗宿主反应。GVHD也可见于脾、胸腺和小肠移植。
发生机制：T细胞起主要作用
IL-2、IL-6、TNF-α、IFN-γ等
ICAM、VCAM、CD44、ELAM-1等
4. 移植物抗宿主反应
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第三节 HLA分型方法
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血清学分型法
应用一系列已知抗HLA的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
操作简便易行、
节约试剂、结果可靠、重复性好
无需特殊设备
优点
缺点
耗时长
不同批号抗血清结果常有不同
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用于HLA分型的微量细胞毒试验
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血清学分型法
死（着染）细胞（%）
记分
结果判断
0～10
1
阴性
11～20
2
可疑阴性
21～50
4
弱阳性
51～80
6
阳性
>80
8
强阳性
0
未试验或不能读数
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细胞学分型法
以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture,MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction,MLR）为基本技术的HLA分型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原（lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。

原理：将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。
根据选用的刺激细胞类型分为：
1．阴性分型法
2．阳性分型法
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遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自的淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计数转化细胞 。

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分子生物学分型法
限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析：最早建立的研究HLA多态性的DNA分型技术
PCR-RFLP分型法：对DN***段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使限制性长度分析的敏感度大大增加
1. RFLP与PCR-RFLP分型法
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序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucleotide, PCR-SSO）是以PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移至***纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、***等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。
分类：
斑点或印渍法：用扩增的待测DNA印渍或点至固相支持物，再与探针行杂交，利于大量标本分型
反向斑点或印渍法：将已知DNA印渍或点至固相支持物，然后与扩