微生物生理生化实验报告.doc

实验十一IMViC与硫化氢试验指导教师:李海花周六第三组学号:060122010041姓名:宋天佳专业:2010级水产养殖学号:030212010025姓名:皇昊专业:2010级化学1班学号:060122010055姓名:续鹏辉专业:2010级水产养殖一、实验目的了解IMViC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义和方法。二、实验原理IMViC是I-吲哚(indoltest)、M-***红(methylredtest)、V-伏-普(Voges-Prolauertest)和C-柠檬酸盐(citratetest)4个实验的缩写。这4个实验主要用来快速鉴别产气杆菌与大肠杆菌,多用于水的细菌检查。大肠杆菌虽非致病菌,但在饮用水时若超过一定指标,则表示水质受粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中,因此检查水是要将两者分开。硫化氢(H2S)实验也是检查肠道细菌的生化实验。(一)吲哚试验(indoltest)吲哚试验是用来检测吲哚试验的产生,有些细菌分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对二***氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红色。色氨酸+H2O色氨酸酶吲哚+NH3+***酸吲哚+对二***氨基苯甲醛玫瑰吲哚(红色)只有部分细菌能产生色氨酸酶,从而具有分解色氨酸产生吲哚的能力,因此吲哚实验可以作为一个生化检测指标。大肠杆菌产色氨酸酶实验结果为阳性(红色),产气肠杆菌不产色氨酸酶实验结果为阴性(无色)。(二)M-***红试验(methylredtest)用来检测由葡萄糖产生的有机酸,如甲酸、乙酸、乳酸等。细菌代谢糖产生酸使培养基变酸(pH下降),使***红指示剂变色:橘黄色()红色()尽管,所有肠道微生物都能发酵葡萄糖产生有机酸,但大肠杆菌和产气肠杆菌有区别:两者在培养早期产生有机酸,但大肠杆菌在培养后仍能维持酸性pH4,而产气肠杆菌则将有机酸转化为非酸性产物,使pH上升至6左右。因此,大肠杆菌为阳性(红色),产气肠杆菌阴性(黄色)。(三)伏-普实验(Voges-Prolauertest)测定细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物(如***酸)的能力。***酸进行缩合、脱羧生成乙酰***醇,此化合物在碱性条件下能被空气中的氧气氧化成二乙酰。二乙酰与蛋白胨中的精氨酸的胍基作用,生成红色化合物,及伏-普反应阳性,不产生红色化合物者为反应阴性。碱性条件、加入少量含胍基的化合物可使反应更明显。大肠杆菌不产***酸实验结果为阴性(无色),产气肠杆菌产***酸实验结果为阳性(红色)。葡萄糖***酸-CO2缩合乙酰乳酸-CO2脱羧乙酰***甲醇+OH--2H胍基+二乙酰红色化合物(四)柠檬酸盐试验(citratetest)用来检测柠檬酸盐是否被利用,有些细菌以柠檬酸钠为碳源,培养基中的柠檬酸和磷酸铵被分解后,产生碱性化合物,使pH升高,当加入1%溴麝香草酚蓝指示剂时,培养基就会有绿色转变为深蓝色,溴麝香草酚蓝指示范围:pH<6黄色,pH6~7绿色,pH>7蓝色。大肠杆菌不能利用柠檬酸盐实验结果为阴性(绿色),产气肠杆菌能利用柠檬酸盐实验结果为阳性(蓝色)。(五)硫化氢实验用来检测硫化氢的产生,也是用于肠道细菌检查的常用生化实验。含硫有机物(如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸)能被部分细菌分解产生H2S,H2S和培养基中的铅盐或铁盐反应,形成黑色的硫化铅或硫化铁沉淀。大肠杆