生化分离技术标准教案.doc

生化分离技术生化系生物学教研室授课内容第一章绪论授课时间 4 学时教学目的熟悉生物物质的概念、种类和来源; 了解分离纯化技术及其基本原理; 熟悉分离纯化工艺的优化、放大和验证工作; 掌握分离纯化的特点与一般步骤; 了解生物分离纯化技术的发展历史; 熟悉生物分离纯化技术的发展趋势。教学重点生物物质的概念、种类和来源;分离纯化工艺的优化、放大和验证工作;分离纯化的特点与一般步骤;生物分离纯化技术的发展趋势。教学难点分离纯化技术及其基本原理;分离纯化工艺的优化、放大和验证工作。教学课型新授教学方法讲授法第一节生物分离与纯化的概念与原理一、生物物质的概念、种类和来源 :氨基酸及其衍生物类、活性多肽类、蛋白质、酶类、核酸及其降解物、糖、脂类、动物器官或组织制剂、小动物制剂、菌体制剂。 2. 生物物质来源:动物器官与组织、植物器官与组织、微生物及其代谢产物、细胞培养产物、血液、分泌物及其代谢物二、生物分离纯化概念指从发酵液、动植物细胞培养液、酶反应液或动植物组织细胞与体液等中分离、纯化生物产品的过程。三、生物分离纯化技术生物技术上游:基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程及组织工程; 下游:生物产品的回收——生物分离与纯化技术,主要包括离心技术、细胞破碎技术、萃取技术、固相析出技术、色谱技术和膜分离技术等。四、分离纯化基本原理有效识别混合物中不同组分间物理、化学和生物学性质的差别,利用能够识别这些差别的分离介质或扩大这些差别的分离设备来实现组分间的分离或目标产物的纯化。原理分离纯化技术产物举例带电性电泳离子交换色谱等电点沉淀蛋白质、核酸、氨基酸氨基酸、有机酸、抗生素、蛋白质、核酸蛋白质、氨基酸化学性质电渗析离子交换色谱亲和色谱氨基酸、有机酸、盐、水氨基酸、有机酸、抗生素、蛋白质、核酸蛋白质、核酸生物功能特性亲和色谱疏水色谱蛋白质、核酸蛋白质、核酸原理分离纯化技术产物举例分子大小、形状离心超滤微滤透析电渗析凝胶色谱菌体、细胞碎片、蛋白质蛋白质、多醣、抗生素菌体、细胞尿素、盐、蛋白质氨基酸、有机酸、盐、水盐、分子大小不同的蛋白质溶解度、挥发性萃取盐析结晶蒸馏等电点沉淀有机溶剂沉淀氨基酸、有机酸、抗生素、蛋白质、香料蛋白质、核酸氨基酸、有机酸、抗生素、蛋白质乙醇、香精蛋白质、氨基酸蛋白质、核酸第二节分离纯化策略一、生物分离纯化技术的特点 、分离纯化困难 、工艺复杂 、操纵要求严格 、分离纯化方法选择的原则 、工艺流程尽量简单化; ; ; ; ; ; 、分离纯化的原材料选择与成品保存 (1) 来源(2) 与目标产物含量相关的因素①合适的生物品种②合适的组织器官③生物材料的种属特异性④合适的生长发育阶段⑤合适的生理状态 ①细胞自溶导致目标产物失活或降解; ②易受微生物污染导致目标产物失活或降解。③易受光照、氧气等的作用导致其分子结构改变。一般植物材料需进行适当的干燥后再保存,动物材料需经清洗后速冻、有机溶剂脱水或制成***粉在低温下保存。 (1) 影响生物产品保存的主要因素①空气②温度③水分④光线⑤pH⑥保存期(2) 蛋白质和酶制品的保存方法①低温下保存②制成干粉或结晶保存③保存时添加保护剂四、分离纯化的准备工作 、分离纯化的基本步骤六、分离纯化技术的综合运用与工艺放大一种合格产品要运用多种分离设备和技术进行纯化,原因为: ①在每个工序中根据现有设备条件和目标产物的性质、规格、用途不同可采用多种分离纯化手段; ②每种分离纯化操作本身各项影响加工效果的因素都直接影响分离纯化的效果和成本; ③各工序间具有复杂的相互影响作用。 、半制品成品上的检测方法是工艺优化的前提 2. 明确优化工艺的评判标准,处理好收率、纯度、经济性之间的平衡应将处理体积大、加工成本低的工序尽量前置,而价格昂贵、精制工序易放在工艺流程的后段。随产物纯度的提高,对工艺流程下游加工所用的设备、试剂的要求亦提高。七、分离纯化的中试放大 ①确定并系统鉴定了生物材料的资源②目标产物的收率稳定即重复性好,质量可靠③工艺路线和操作条件已经确定,并且已经建立了原料、半制品、产品的的分析检测方法④已经进行过物料平衡预算,并且建立了“三废”的处理和监测方法⑤确立了中试规模及所需原材料的规格和数量⑥建立了教完善的安全生产预警措施和方