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核酸分子杂交技术.ppt


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核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术核酸分子杂交技术李如波中国医科大学法医学院李如波李如波中国医科大学法医学院中国医科大学法医学院核酸分子杂交技术(Nucleic acid molecular hybridization) 是检测核酸分子间序列同源性的一种技术。不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列,即可按碱基配对规则以氢键相结合。通常是先对一种核酸进行标记(如放射性同位素 35S, 32P 或生物素等)作为探针,去探测另一种核酸序列。核酸分子杂交可以在 DNA 与 DNA , RNA 与 RNA ,或 DNA 与 RNA 之间进行。由于这种技术具有高度的特异性和灵敏性,已广泛应用于生物学、医学科学研究,临床传染病和遗传病的诊断。核酸分子杂交技术(Nucleic acid molecular hybridization) 是检测核酸分子间序列同源性的一种技术。不同来源的核酸单链只要彼此间有一定的互补序列,即可按碱基配对规则以氢键相结合。通常是先对一种核酸进行标记(如放射性同位素 35S, 32P 或生物素等)作为探针,去探测另一种核酸序列。核酸分子杂交可以在 DNA 与 DNA , RNA 与 RNA ,或 DNA 与 RNA 之间进行。由于这种技术具有高度的特异性和灵敏性,已广泛应用于生物学、医学科学研究,临床传染病和遗传病的诊断。一、核酸分子杂交的基本原理从化学和生物学意义上理解,探针(Probe) 是一种分子,它带有供反应后检测的合适标记物,并仅与特异靶分子反应。抗原-抗体、外源凝集素- 碳水化合物、亲和素- 生物素、受体- 配体( ligand ) 以及互补核酸间的杂交均属于探针- 靶分子反应。蛋白质探针(如抗体)与特异靶分子是通过混合力(疏水、离子和氢键)的作用在少数特异位点上的结合,而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同,通过氢键在几十、几百甚至上千位点上的结合。核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍有可能进行碱基配对,这取决于修饰的部位和修饰物的性质。标记的探针每 1kb 只掺入 10-30 个修饰碱基, 仅4% -12 %的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点外的碱基配对较弱或不存在,但对整个杂交分子的稳定性影响很小。一、核酸分子杂交的基本原理一、核酸分子杂交的基本原理从化学和生物学意义上理解,探针(Probe) 是一种分子,它带有供反应后检测的合适标记物,并仅与特异靶分子反应。抗原-抗体、外源凝集素- 碳水化合物、亲和素- 生物素、受体- 配体( ligand ) 以及互补核酸间的杂交均属于探针- 靶分子反应。蛋白质探针(如抗体)与特异靶分子是通过混合力(疏水、离子和氢键)的作用在少数特异位点上的结合,而核酸探针与互补链的反应则是根据杂交体的长短不同,通过氢键在几十、几百甚至上千位点上的结合。核苷酸经某一原子、功能基团或长侧链修饰后仍有可能进行碱基配对,这取决于修饰的部位和修饰物的性质。标记的探针每 1kb 只掺入 10-30 个修饰碱基, 仅4% -12 %的单个碱基被修饰的类似物取代了。尽管掺入位点外的碱基配对较弱或不存在,但对整个杂交分子的稳定性影响很小。原位杂交原理示意图二、核酸探针的种类根据标记方法不同可分为: 放射性探针; 非放射性探针两大类, 根据核酸的性质不同又可分为: DNA 探针 RNA 探针 cDNA 探针 cRNA 探针 DNA 探针还有单链( ssDNA )和双链( dsDNA )之分。所以原位杂交可分为 DNA-DNA , cDNA -RNA , RNA- RNA 和寡核苷酸与 DNA 或 RNA 等杂交方式。二、核酸探针的种类二、核酸探针的种类根据标记方法不同可分为: 根据标记方法不同可分为: 放射性探针; 非放射性探针两大类, 根据核酸的性质不同又可分为: 根据核酸的性质不同又可分为: DNA 探针 RNA 探针 cDNA 探针 cRNA 探针 DNA 探针还有单链( ssDNA )和双链( dsDNA )之分。所以原位杂交可分为 DNA-DNA , cDNA -RNA , RNA- RNA 和寡核苷酸与 DNA 或 RNA 等杂交方式。

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  • 时间2017-01-16