血涂片染色及白细胞分类计数.ppt

临床检验基础实验六临床检验基础实验六血涂片染色白细胞分类计数 试剂成分: 伊红——酸性——嗜碱性染料亚甲蓝(美蓝) ——碱性——嗜酸性染料甲醇——固定溶剂磷酸缓冲液( pH: - ) 着色原理: 化学亲和作用+物理的吸附作用伊红+细胞中的碱性物质——红色亚甲蓝+酸性物质——蓝色中性物质+伊红和亚甲蓝——淡紫色 pH 对细胞染色影响 pH pH过低过低<PI <PI 正电荷增多正电荷增多————易与易与伊红伊红结合结合————偏红偏红 pH pH过高过高>PI >PI 负电荷增多负电荷增多————易与易与亚甲蓝亚甲蓝结合结合————偏蓝偏蓝最适环境最适环境:弱酸( :弱酸( - - ) ) 血涂片: 血涂片: 淡紫红色淡紫红色镜镜下: 下: 成熟红细胞成熟红细胞————粉红色粉红色白细胞白细胞————胞质胞质呈现其特有的色彩呈现其特有的色彩细胞核细胞核紫红色紫红色染色质结构清楚染色质结构清楚判别方法染色偏酸:红细胞、嗜酸粒细胞颗粒偏红白细胞核淡紫红色或不着色染色偏碱: 染色偏碱: 红细胞红细胞灰蓝色灰蓝色中性粒细胞颗粒中性粒细胞颗粒深暗、偏粗,紫黑色深暗、偏粗,紫黑色嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞暗褐色或紫黑色、蓝色暗褐色或紫黑色、蓝色 器材器材载玻片、推玻片、洗耳球载玻片、推玻片、洗耳球 试剂试剂瑞氏染液(商品) 瑞氏染液(商品) I I 液:瑞特染料液:瑞特染料、、纯甲醇纯甲醇、、甘油甘油 I I 液:磷酸盐缓冲液( 液:磷酸盐缓冲液( KH KH 2 2PO4 Na PO4 Na 2 2HPO4 HPO4 ) ) 操作操作制备血涂片(待完全晾干) 制备血涂片(待完全晾干) 加加I I液数滴覆盖整个血膜液数滴覆盖整个血膜 -1 min 滴加等量或稍多的滴加等量或稍多的 II II液(洗耳球混匀) 液(洗耳球混匀) 5-10 min 冲洗冲洗(注意) (注意) 干燥干燥??注意事项注意事项 1. 2. 3. 4. ,先加缓冲液再加染液染色过淡可复染,先加缓冲液再加染液 5. ,也可用染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间,也可用甲醇脱色甲醇脱色 6. 、室温及细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。应在具体实践中摸索合适的时间。应在具体实践中摸索合适的时间。