细胞工程复习试题.docx

绪论细胞工程的特点①前沿性;②争议性;③综合性;④应用性细胞工程: 细胞工程是指按照一定的设计方案, 通过在细胞、亚细胞或组织水平上进行实验操作,获得重构的细胞、组织、器官以及个体,创造优良品种和产品的综合性生物工程。细胞培养: 指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境, 在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下, 使期生长繁殖, 并维持其结构和功能的一种培养技术. 第一章动物细胞工程实验室 5 部分:(1) 无菌操作室;(2) 培养与观察室;(3) 制备室;(4)储藏室;(5) 清洗和灭菌室 CO2 培养箱: CO2 培养箱适合开放式或半开放式的细胞培养,能恒定地提供定量 CO2, 保持细胞培养时 PH 的稳定,通常使用条件为 37℃,5% CO2 。第三章细胞生长曲线: 是观察细胞在一代生存期内的增生过程的重要指标,以培养时间( d )为横坐标、细胞密度为纵坐标所做出的曲线。细胞贴壁率: 又称接种存活率,用于观察贴壁附着生长细胞,主要反映细胞的生存能力,和部分底物材料的相容性。 MTT 比色法的原理: 活细胞中脱氢酶能将四唑盐( MTT )还原成不溶于水的蓝紫色产物( formazan) , 并沉淀在细胞中, 而死细胞没有这种功能。二甲亚砜( DMSO ) 能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物, 溶液颜色深浅与所含的 formazan 量成正比。再用酶标仪测定 OD 值。体外活体染色: 就是在体外条件下用某种染色剂( 即活体染料) 对活的细胞或组织进行染色, 而不影响活细胞的生命活动的一种方法。污染的排除可使用用抗生素,预防用药一般用双抗生素( 青霉素加链霉素)。第四章体外培养细胞的分型: 1、贴壁性细胞:①上皮细胞型;②成纤维细胞型;③游走细胞型;④多形型细胞 2、悬浮型细胞培养细胞的生长特点: ①贴附②接触抑制③密度抑制接触抑制: 细胞从接种到长满底物表面后,由于细胞繁殖数量增多相互接触后,不再增加。密度抑制: 细胞接触汇合成片后, 虽发生接触抑制, 但只要营养充分, 细胞仍然能够进行增殖分裂, 数量仍在增多, 但当细胞密度进一步增大时, 培养液中营养成分的减少, 细胞营养的枯竭和代谢物的影响,则发生密度抑制,导致细胞分裂停止。细胞系: 指由原代培养经初步纯化, 获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。细胞株: 指细胞系经进一步的克隆化,得到的由单一细胞组成的群体。细胞系的生长过程: 原代培养期→传代期→衰退期每代细胞的生长过程: 潜伏期→指数生长期→停止期培养细胞的遗传学特征:1、核型变化( 当细胞发生转化或成为肿瘤细胞时, 大多失去 2倍体核型, 成为多倍体或异倍体。);2、永生化和恶变( 细胞永生化也称不死性, 是细胞获得持续生长增殖能力的特性。而恶性细胞不仅能长期增殖生长并有异体接种致瘤性。);3、细胞性别(女性细胞的巴氏体和男性的 Y 小体在培养细胞群中都可检测到。说明培养细胞仍保持着性别特征。) 细胞培养的常用液体: 水、平衡盐溶液、消化液(胰蛋白酶、 EDTA-Na 及胶原酶溶液)、消化酶抑制液、 PH 调整液。原代培养: 是将动物机体的各种组织从机体中取出, 经各种酶( 常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用 EDTA) 或机械方法处理, 分散成单细胞, 置合适的培养基中培养, 使细胞得以生存、生长和繁殖。原代细胞取材的基本要求:1、取材要注意新鲜和保鲜;2、应严格无菌;3、防止机械损伤; 4 、去除无用组织和避免干燥; 5 、应注意组织类型、分化程度、年龄等; 6 、作好记录组织细胞分离: 1、机械法①离心分离法②切割分散法③机械分散法 2、消化法(1 )酶法①胰蛋白酶消化法;②胶原酶消化法;(2) 非酶法③螯合剂消化法细胞培养的方法:(1) 组织块培养法;(2) 单层细胞培养;(3) 悬浮细胞培养。细胞的冻存,复苏: 1 .细胞的冻存①消化细胞(同前) ,将细胞悬液收集至离心管中。② 1000 rpm 离心 10 分钟,弃上清液。③沉淀加含保护液的培养,计数,调整至 5× 106/ml 左右。④将悬液分至冻存管中,每管 1 ml。⑤将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。⑥贴上标签,写明细胞种类、冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。⑦按下列顺序降温: 室温→4℃( 20 分钟)→冰箱冷冻室( 30 分钟)→低温冰箱( -30 ℃1 小时) →气态氮( 30 分钟) →液氮。 2 .细胞的复苏①将冻存于液氮中的冻存管取出( 取出时应戴好手套和防护眼镜), 迅速放入 37-40 ℃水浴中使其在 1min 内融化。②无菌操作下打开冻存管,将细胞悬液吸取到培养瓶中,补足生长液后,置 37℃培养。待细胞贴壁(约 4h )后,换培养液一次。③或取出细胞悬液至离心管中,补加