第2章 DNA重组限制性内切酶与DNA片段化.ppt

第二章 DNA 重组 DNA 的种类?染色体 DNA ?病毒和噬菌体 DNA ?质粒 DNA ?线粒体和叶绿体 DNA TMV T4 噬菌体染色体 DNA天然 DNA 的提取(自学) 分子克隆实验指南(第三版) 精编分子生物学实验指南 DNA 片段化?核酸内切酶和 DNA 连接酶的发现与应用, 才真正使 DNA 分子的体外切割和连接成为可能。这两种酶是基因工程赖以创立的重要的酶学基础。限制性内切酶?一类能识别 dsDNA 分子内部的特定核苷酸序列,并由此切割 DNA 双链结构的核酸酶?来源:主要从原核生物中分离纯化而来?II型核酸内切酶: 2300 种以上,可识别 230 种不同的 DNA 序列( 1994 年,美国,分子生物学百科全书) 目前发现有限制性内切酶的生物主要是细菌,少数霉菌和蓝藻。?这种大自然赋予基因工程学家的了不起的礼物是如何发现的呢 寄主控制的限制与修饰现象?大多数的细菌对于噬菌体的感染都存在这一些功能性障碍。?如:目前尚未发现有任何一种既可感染假单胞菌又可感染大肠杆菌的噬菌体,且非寄主细菌的 RNA 聚合酶不能够识别“外源”噬菌体的启动子,即使噬菌体的吸附和转录能进行,也仍然存在这另一种功能障碍——即为寄主控制的限制和修饰现象这种现象类似于人体的免疫系统,它可辨别自身的 DNA 和外来的 DNA , 并使后者降解——吴乃虎,基因工程(第二版,上册), P122 限制——修饰现象 K λ(B)λ(K) λ(B):能够在大肠杆菌 B菌株上生长的λ噬菌体第一次感染 K菌株, 形成的噬菌斑很少, 生长受寄主限制 Kλ(K) 存活下来的噬菌体再次感染 K菌株,则形成的噬菌斑很多,不受限制( K菌株已经对其进行了修饰)产生这种现象的原因何在***化酶: 能使细胞自身核酸的内切酶识别序列的碱基***化,从而使自身核酸免受内切酶水解——细菌的“防御”系统核酸内切酶: 识别并水解外源 DNA ( 外来核酸在内切酶识别序列上没有***化修饰作保护) 研究发现:原来是由两种酶配合完成,一种是起修饰作用的***化酶,另一种是核酸内切酶( 1962 年) 限制修饰