非病毒基因载体PAMAM-HA聚合物体外细胞毒性的系列技巧.doc

非病毒基因载体 PAMAM-HA 聚合物体外细胞毒性的系列研究胡海梅 1,李晓琳?,梁双红(广东药学院,生命科学与生物制药学院,广东广州 510006 ) 【摘要】目的: 研究非病毒基因载体聚酰******型树状大分子-透明质酸( PAMAM-HA )的体外细胞毒性。方法:对已合成的多种 PAMAM-HA 聚合物, 采用 MTT 法、流式细胞技术凋亡检测法,检测其对不同细胞的细胞毒性和诱导细胞凋亡的能力。结果:各聚合物的细胞毒性与聚合物溶液的浓度、聚酰******型树状大分子( polyamidoamine,PAMAM )的代数及透明质酸( HA )的接枝量和接枝密度有关;聚合物中 PAMAM G4 -HA3850-5% 、 PAMAM G5 -HA3850-5% 可以诱导肝癌细胞 Bel-7402 细胞凋亡。结论: 经不同接枝量和接枝密度的 HA 修饰的 PAMAM ,细胞毒性降低,聚合物 PAMAM G4 -HA3850-5% 和 PAMAM G5 -HA3850-5% 的细胞毒性略大,并且可以诱导肿瘤细胞凋亡。【关键词】 PAMAM ; HA ; 肿瘤细胞; 细胞毒性;细胞凋亡 Study on biological activity ofa non - viral gene vector PAMAM-HA polymer Hu Haimei , Li Xiaolin, Liang Shuanghong (School of Life Science and Biopharmaceutics, Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou 510006, China) ) [Abstract]: Objective: Study on the cytotoxicity of PAMAM-HA asanon - viral gene vector in vivo. Methods : Our laboratory had been synthesized various polymers PAMAM-HA. MTT assay was used to evaluate the cytotoxicity of various polymers on different cells. Flow cytometry technique apoptosis assay was used to determine polymer PAMAM-HA inducing apoptosis on cell. Results: The cytotoxicity of each polymers was related to the concentration of the polymer ,the molecular weight of ?基金项目:国家自然基金项目( 31000429 ) 1通讯作者:胡海梅( 1975- ),女,博士,副教授,主要从事缓、控释制剂、靶向药物载体、药物新材料和新剂型研究,电话: 020-39352201 , Email : gzhm368@ 。 PAMAM and incubating time; Polymer PAMAM G4 -HA3850-5% 和 PAMAM G5 -HA3850-5% may induce apoptosis in Bel-7402 cell. Conclusion: PAMAM modified by the grafting density and quantity of the graft of HA can reduced the cytotoxicity; Polymer PAMAM G4 -HA3850-5% and PAMAM G5 -HA3850-5% had higher cytotoxicity and may induce apoptosis. [Keywords] : PAMAM ; HA; tumor cells; cytotoxicity ; apoptosis 非病毒载体主要有阳离子聚合物、阳离子多肽和阳离子脂质体等[1-4] ,具有靶向性,低细胞毒性,较高的安全性,并且易于进行结构修饰等优点,已成为基因治疗中的热点[5,6] 。聚酰***-***型树状大分子( PAMAM )由 Tomalia 等[7]人首次成功合成后,关于 PAMAM 的研究才逐步展开。 PAMAM 表面带正电荷的氨基基团可与带负电的 DNA 相互作用形成复合物,可以保护 DNA 免受核酸酶降解[8-10] ,作为药物载体和基因载体具有较高的稳定性、生物兼容性良好、无免疫源性、使用剂量下低细胞毒性的优势[11-13] 。但是, PAMAM 的表面具有大量的