非那西丁在大鼠体内的药代动力学技巧.pptx

ic of intravenous phenacetin in rats 导师: 答辩: 关于非那西丁方法设计样品处理 HPLC 操作数据处理目录/ CONTENTS 12345药物性质第一部分分子式: C10H13NO2 分子量: 类别:原料药、解热镇痛类原料药。性状:本品为白色,有闪光的鳞片状结晶或白色结晶性粉末,无嗅,味微苦。本品在乙醇或***仿中溶解,在沸水中略溶,在水中极微溶解。药物性质内服易吸收,服后 20-30 分钟始现药效。持续 5-6 小时,吸收后非那西丁大部分在肝脏迅速去乙基生成对乙酰氨基酚(扑热息痛)而呈现解热、镇痛作用。其后主要以结合形式从尿中排除;小部分经去乙酰基生成对氨苯***,后者使血红蛋白变为高铁血红蛋白,因而表现为非那西丁的发绀毒性反应。体内过程亚氨基醌能使血红蛋白变成高铁血红蛋白而失去携氧能力,造成组织缺氧、红细胞溶解而致溶血、黄疸,肝脏损害等。正常情况下,毒性中间代谢物迅速与谷光甘肽结合或转化成无毒的硫醚氨酸( meracpturic acid ),从尿中排出。只有当剂量过大或动物缺乏葡萄糖醛酸结合代谢方式时,才出现中毒反应。药动学方法设计第二部分国内相关研究综述实验动物仪器与试剂参数操作 Waters 高效液相色谱仪(包括泵、检测器) ; 色谱工作站非那西丁标准品硫酸阿托品标准品乙***为色谱纯水为重蒸水其余试剂均为分析纯清洁级健康 Wistar 大鼠 32 只, 雌雄各半体重( 250 ± 10) g 禁食 16 小时自由饮水由实验室动物房提供 : 称取标准品非那西丁 1250mg- 乙醇定容至 100ml 250g 大鼠灌胃 ( 125mg/1000g ) 眼眶静脉丛取血时间每次 300 μl, - 1h--2h-- 3h--4h-6h-8h- 12h-24h-48h 13 次-3900 μl 配标准液大鼠灌胃 125mg/1000g (或者尾静脉注射 20mg/1000g ) 眼眶静脉丛取血血浆处理 HPLC 检测数据处理主要参考文献:反相高效液相色谱法检测非那西丁血药浓度—刘军亦有用茶碱做内标 :丙三醇注射剂非那西丁 5mg/ml- 40ml 250g 大鼠注射 1ml ( 20mg/1000g ) 5 10 15 30 45 60 90 120 min 于眼底静脉丛取血 0. 5 ml样品处理第三部分血浆处理取血检测解冻眼眶静脉丛取血 13 次,每次 300 μl置肝素化离心管中,4 000 r/min 离心 10 min, 移取上层血浆,密封-20 ℃冰冻待用 RP-HPLC 1 mL, 加氨水 100 μ L,轻摇,再加***仿 5 mL, 涡旋 3 min, 超声 40min ,静置过夜。收集下层***仿,于 60 ℃水浴上用氮气吹干,再用甲醇溶解残渣,并定容至 200 μ L,加入内标硫酸阿托品, 浓度为 15 mg L -1。 12 000 r · min-1 离心 6 min, 取上清液 20 μL进样分析。 2. 200 μ l 血浆中加入 100 μ l 10% 高***酸( 含内标硫酸阿托品, 浓度为 15 mg L - 1) ,漩涡振荡 1 min , 15 000 r min -1离心 10 min ,取上清供 HPLC 分析 0· 2 mL, 精密加入冷藏的 10% 三***乙酸 40 μL ( 含内标硫酸阿托品, 浓度为 15 mg L - 1),涡旋 3 min,12 000 r/min 离心 10 min, 吸取上清液约 120 μL置于尖底进样瓶中,HPLC 自动进样 HPLC 操作第四部分 1234 色谱柱 C18 流动相:乙***-水( 25 : 75 )三乙*** % 磷酸调节 pH 至 灵敏度 流速 1ml/min 波长 210nm 柱温 30 ℃硫酸阿托品 16ng 为最低检测限非那西丁 μg( SN=3 :1)为最低检测限色谱条件 HPLC 系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。系统组成流动相的准备: 将去离子水和有机溶剂分别用 微孔滤膜过滤,除去颗粒性杂质,倒入贮液瓶,超声波脱气 15 分钟后,将之放置在仪器的试剂架上。开启稳压电源方法编辑和参数设定 SOP 自动进样序列表及数据文件的设置样品测定与数据报告关机每次分析样品之前必须用已知含量的参照样对仪器进行校验, 当实测与标值的相对偏差<% 注意事项及维护 SOP HPLC