基因工程第二章基因工程的酶学基础预案.ppt

第二章基因工程的酶学基础(5学时) 常见的基因工程工具酶及其应用 1. 使核酸降解的核酸酶类: 2. 催化核酸合成的酶类: 3. 核酸修饰酶类; 核酸内切酶、核酸外切酶 DNA 连接酶、 DNA 聚合酶、逆转录酶、 RNA 聚合酶***化酶、激酶、基团转移酶、磷酸酶等第一节限制性核酸内切酶限制/修饰系统(R-M, Restriction-modification system) B和K分别代表大肠杆菌的 B和K菌株(引自 Streips 等, 2002 ) 一、寄主控制的限制与修饰机理修饰(modification) :指寄主本身的 DNA ,由于在合成后通过***化酶的作用得以***化,使 DNA 得以修饰,从而免遭自身限制性酶的破坏。一、寄主控制的限制与修饰的机理限制(restriction) :指一定类型的细菌可以通过限制酶的作用,破坏入侵的噬菌体 DNA ,导致噬菌体的寄主幅度受到限制。维护宿主遗传稳定的保护机制。限制/修饰系统(R-M ,Restriction-modification system) ?各种细菌都能合成一种或几种能够切割双链 DNA 的内切核酸酶,以此来限制外源 DNA 的入侵?几乎所有的限制性内切核酸酶都和能识别、***化相同 DNA 位点的***转移酶( MTase )共同作用,一起构成限制-修饰系统。寄主控制的限制与修饰的作用: 一是保护自身的 DNA 不受限制; 二是破坏外源 DNA 使之迅速降解。基因工程中,应采用缺少限制作用的菌株作为受体。 K12 : rk + mk + rk - mk - (用于转化实验) rk - mk + (用于转化实验) rk + mk -(***型表型)