青(草)鱼孵化操作技巧.doc

青鱼孵化操作技巧一、产卵池及催产剂(一)产卵池产卵池的形状、面积和构造各地不一。主要有圆形、椭圆形等几种。要求收卵和操作方便,并无死角。水深 — 2 米。产卵池的面积视生产规模和亲鱼能进行正常产卵活动的要求而定,一般以 60— 120 平方米较为适当。每 6— 8 平方米约可放亲鱼一组。产卵池一般使用水泥和砖砌成。(二)催产剂的种类有效的催产剂是成熟的同种鱼或鲤、鲫鱼的脑垂体以及人的绒毛膜促性腺激素(HCG) 和促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A) 等. 1. 脑垂体的摘取和保存摘取脑垂体的鱼类最好是性成熟的个体。摘取的时期最好是在临近生殖季节时, 如以鲤鱼而论, 可在冬季捕捞时大量摘取; 冬季鲤鱼死后一、二天内鱼体尚保持相当鲜度的, 其垂体仍合用。在长江流域每年 11 月份次年 3 月鲤鱼产卵季节前都可以。脑垂体位于间脑下面的蝶骨里。摘取时,应将头盖骨切开。这时还不能清楚地看到脑,必须用镊子夹住棉花将脑腔中的脂肪拨除, 并吸去因割破血管而溢出的血液, 才能看到整个鱼脑。然后用镊子将连在脑后的脊髓挑起, 轻轻将脑翻开, 脑垂体( 白色心脏形的小颗粒) 往往即与脑分离, 留在骨窝中; 为了使脑垂体不致破损, 必须用小镊子将脑垂体旁边的结缔组轻轻剔开, 然后将脑垂体取出。脑垂体可以新鲜应用, 或用***(或纯酒精)浸泡(所用***的量,必须比脑垂体本身体积大 20— 30倍两次,第一次浸泡 4— 6 小时;第二次浸泡 6— 10 小时,然后保存备用。保存方法有两种:一种是把浸泡的脑垂体取出,待干燥(阴干) 后放在小瓶中用蜡密封; 另一种是在第二次浸泡时, 连同浸液密封在小瓶中, 保存备用。尽可能放在干燥器中。干法保存的有效时间可达数年之久, 用后如有多余的脑垂体, 则仍须将瓶封好, 放入干燥器中保存。 2. 绒毛膜促性腺激素(以下简称激素)提取方法: (1) 粗制品: ①原料的选择及处理: 提取激素的原料是新鲜孕妇尿。由于孕妇尿本身所含的激素量差异很大, 孕妇尿中激素含量于怀孕 40— 110 天内最多。因此, 收集怀孕五个月以内的孕妇尿较为适宜。前一日将清洁尿桶放在孕妇家中,或医院人工流产手术室内,供存放孕妇尿较专用。如果室温在 18oC 以上时, 尿桶中应放 2 毫升防腐剂。次日上午到孕妇家中和医院手术室收集尿桶, 并检查孕妇尿是否澄清和尿的 pH 是否在 7 以下,如果不符合规定,即将该尿弃去。将符合要求之孕妇尿,经过二层纱布过滤,滤入陶瓷缸中。②吸附: 在搅拌下,用 5% 或 10% 的工业盐酸调至 pH5 (用比色法测定)。量出尿的总体积,按 1,000 毫升孕妇尿加 80— 100 毫升苯甲酸酒精饱和液比例,在不断搅拌下慢慢加入苯甲酸酒精饱和液于孕妇尿中, 这时即有乳白色絮状沉淀物产生, 不断地顺流和逆流搅拌半小时至一小时,使苯甲酸吸附充分。静止 2— 3 小时。用橡皮管将陶瓷缸中上部清液吸出弃去。下层的白色沉淀, 用白布袋滤出, 并将白布袋吊起来以滤去废液, 然后放在木压床上压干。③脱附: 将压干的白色加工品分成小块,然后放于陶器缸中,以每 1,00 0 毫升孕妇尿加 80— 100 毫升 95% 酒精之比例加入酒精,不断搅拌脱附,直到苯甲酸全部溶解呈咖啡色液体为止,即有絮状沉淀产生。静止 8— 10 小时, 用橡皮管吸去上层清液, 沉淀物用布氏漏斗减压过滤。在快干时可用 95% 酒精、***洗涤一、二次,再抽干。抽干后放入以五氧化二磷或无水氧化钙和固体氢氧化钠作干燥剂的干燥器中干燥。干燥后即成呈淡黄色的粗制品, 粗制品可研成粉末称重。若不及时精制,可置于棕色广口瓶中密闭备用。精制品: 抽提、离心去杂质: ( a) 称取粗制品研磨。置烧怀中, 每一克粗制品加 的 1/1 5 克分子浓度醋酸- 醋酸钠缓冲液 30 毫升搅拌提取 30— 60 分钟,温度以低于 15℃为宜。( b) 提取液离心, 以每分钟 4,000 — 5,000 转的转速, 离心 20— 30 分钟,然后取出上层微混清液(含激素) ,准确量其体积。激素和杂蛋白分离: ( a )加入提取液体积的 10% 饱和***化钠溶液,再以 克当量浓度氢氧化钠溶液调节 pH 到 6,若 pH 大于 6, 则用 克当量浓度盐酸调至 pH 为 6。( b) 边搅拌边加 95% 酒精, 使溶液含酒精为 50% 以沉淀杂蛋白。静止过夜,分二层,上层为微混清液,下层灰白色沉淀物为杂蛋白。( c )次日以约浆过滤得澄清液,滤液加 95% 酒精使溶液含酒精为 85% ,静止 10— 18 小时。( d )用橡皮管吸弃上层清液,离心分离出沉淀物。( e )以少量 95% 酒精洗涤沉淀物,放入耐酸过滤斗或布氏漏斗减压过滤, 将干时, 加少量无水酒精、丙