双价肾综合征出血热灭活疫苗(Vero细胞).doc

双价肾综合征出血热灭活疫苗( Vero 细胞) Shuangjia Shenzonghezheng Chuxuere Miehuoyimao (Vero Xibao ) Haemorrhagic Fever with Renal Syndrome Bivalent ine (Vero Cell), Inactivate d 本品系用Ⅰ型和Ⅱ型肾综合征出血热(简称出血热)病毒分别接种 Vero 细胞, 经培养、收获、病毒灭活、纯化,加入氢氧化铝吸附后制成。用于预防 I型和 II型肾综合征出血热。 1 基本要求生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符“凡例”的有关要求。 2制造 生产用细胞生产用细胞为 Vero 细胞。 细胞的管理及检定应符合“生物制品生产和检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。各种子批代次应不超过批准的限定代次。取自同批工作细胞库的 1 支或多支细胞管,经复苏扩增后的细胞仅用于一批疫苗的生产。 细胞制备取工作细胞库的 1 支或多支细胞管,经复苏扩增至接种病毒的细胞为一批。将复苏后的单层细胞消化,分散成均匀的细胞,加入培养液后混合均匀,置 37℃培养 3-4 天,成均匀单层细胞。 毒种 名称及来源生产用毒种为分离自肾综合征出血热病人血清中的I型出血热病毒SD980 5株和 II型出血热病毒 HB9908 株, 或其他经批准的出血热 I型和 II型毒株。 病毒种子批的建立应符合现行版《中国药典》三部通则中“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。 2 出血热毒种 SD9805 株和 HB9908 株的原始种子批代次均为鼠脑第 3 代。原始种子批毒种经 Vero 细胞传代分别建立主种子批和工作种子批。I型出血热毒种 SD980 5 株主种子批应不超过第 9代,工作种子批应不超过第 14代;II型出血热毒种 HB990 8 株主种子批应不超过第 8代, 工作种子批应不超过第 13。 种子批毒种的检定主种子批应进行以下全面检定,工作种子批应至少进行 - 项检定。 鉴别试验将各型毒种 10倍系列稀释,每个稀释度分别与已知的相应型别的出血热病毒血清参考品等量混合,同时以正常兔血清做空白对照。分别置 37℃水浴 90分钟,接种 Vero-E 6单层细胞,于 37℃CO 2浓度为 5%条件下培养 10-14 天,以免疫荧光法测定, 中和指数应大于 1000 。 病毒滴定将各型毒种 10倍系列稀释,取适宜稀释度接种 Vero-E 6细胞,于33℃培养 10-1 2 天,采用免疫荧光法进行测定,病毒滴度均应不低于 50/ml 。 无菌检查依法检查(附录 XII A),应符合规定。 支原体检查依法检查(附录 XII B),应符合规定。 病毒外源因子检查依法检查(附录 XII C),应符合规定。 免疫原性检查取主种子批毒种制备双价原疫苗,接种 2kg 左右的白色家兔(家兔血清出血热病毒抗体检测应为阴性) ,每批 4 只,后腿肌肉注射 ,7 天后以同法再免疫一次。第一次免疫后 4 周采血分离血清,用空斑减少中和试验测中和抗体,中和用