高中生物 专题5课题1 DNA的粗提取与鉴定课件2 新人教版选修1.ppt

课题五课题五 DNA DNA 的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识(一)提取 DNA 的方法 1、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子 2、生物大分子主要指蛋白质、酶和核酸 3、提取 DNA 的基本思路利用 DNA 与RNA 、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取 DNA ,去除其他成分 4、DNA 的溶解性 DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反 5、讨论: ①根据 DNA 在NaCl 溶液中的溶解度曲线图, 思考在什么浓度下, DNA 的溶解度最小? DNA 在NaCl 溶液中的溶解度是如何变化的? 在NaCl 溶液浓度低于 mol/L 时, DNA 的溶解度随 NaCl 溶液浓度的增加而逐渐降低;在 mol/L 时, DNA 溶解度最小;当 NaCl 溶液浓度继续增加时, DNA 的溶解度又逐渐增大。当***化钠的物质的量浓度为 2 mol /L时, DNA 的溶解度最大,浓度为 mol /L时, DNA 的溶解度最低。利用这一原理,可以使 DNA 在盐溶液中溶解或析出。②如何通过控制 NaCl 溶液的浓度使 DNA 在盐溶液中溶解或析出? DNA 不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些蛋白质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将 DNA 与蛋白质进一步分离 6、DNA 在酒精溶液中的溶解性 7、DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性①蛋白酶能水解蛋白质,但是对 DNA 没有影响②大多数蛋白质不能忍受 60-80°C的高温,而 DNA 在80°C以上才会变性③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质,但对 DNA 没有影响补充: DNA 的变性是指 DNA 分子在高温下解螺旋,其温度在 80℃以上,如在 PCR 技术中 DNA 变性温度在 95℃。 8、DNA 的鉴定① DNA 与二苯***(沸水浴)会染成蓝色,因此, 二苯***可以作为鉴定 DNA 的试剂③紫外灯照射法 A、配制染色剂,用蒸馏水配制万分之五的溴化已锭( EB) B、将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹于蜡纸上, 再滴一滴 EB溶液染色 C、将蜡纸放在紫外灯(260 nm) 下照射(暗室中),可见橙红色的荧光(DNA 的紫外吸收高峰在260 nm 处) ②***绿(蓝绿色) 原理总结: 通过利用不同浓度 NaCl 溶液溶解或析出 DNA , 可以从细胞中提取和提纯 DNA ;再利用酒精进一步将 DNA 与蛋白质分离开来,达到提纯的目的;最后利用二苯***试剂鉴定提取的物质是否是 DNA 二、 DNA 的粗提取与鉴定的实验设计(一)实验材料的选取 1 、材料: 鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取 2~3种实验材料) 2 、原则:凡是含有 DNA 的生物材料都可以考虑, 但选用 DNA 含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大