实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离.doc

—————————————————————————————————实验二十二胡萝卜素的柱层析分离【目的】 1 、掌握层析法的基本原理 2 、了解柱层析分离法在生物化学中的应用【原理】胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等植物中, 因其在动物体内变成维生素 A 故又称维生素 A原, 胡萝卜素可用酒精、石油醚和***等有机溶剂从食物中提取出来,且能被氧化铝(A12O3) 所吸附。由于胡萝卜素与其他植物色素的化学结构不同, 它们被氧化铝吸附的强度以及在有机溶剂中的溶解度都不相同, 故将提取液用氧化铝( 固定相) 吸附, 再用石油醚( 流动相) 等冲洗层析柱, 即可分离成不同的色带。同溶质的其它色素比较, 胡萝卜素吸附最差, 跑在最前面, 故也最先被洗脱下去,且可分成两种胡萝卜素( α- 胡萝卜素、β- 胡萝卜素) 【器材】研钵、分液漏斗、层析管等。【试剂】 1、 95% 乙醇 2 、石油醚 3、 1% ***- 石油醚 4 、氧化铝( Al2O3 ) 5 、无水硫酸钠—————————————————————————————————【操作】 1 、提取取烘干的红辣椒皮 3~4 个, 剪碎后放入研钵中,加 95% 乙醇 4ml , 研磨至提取液成深红色, 在加石油醚 6ml 研磨 3~5 分钟, 研磨中可酌情再加石油醚 10ml 左右。用纱布将提取液直接滤入分液漏斗中, 用 30ml 蒸馏水洗涤三次, 直至水层透明为止( 为除去提取液中的乙醇)。将红色的石油醚倒入干燥的试管中,加入少量无水硫酸钠除去水分, 用软木塞塞紧以免石油醚挥发。 2 、层析柱的准备将玻璃层析管(底部有过滤垫) ,装入氧化铝( Al2O3 )粉末约 10cm 高度,于其上铺一张圆形的小滤纸。将管垂直夹在铁夹上备用。 3 、层析用滴管吸取约 2ml 石油醚, 沿管壁加入层析柱, 当层析柱上端石油醚即将但尚未完全浸入氧化铝时,即用滴管吸取石油醚提取液 沿管壁加入层析柱。待提取液全部