流式细胞相关操作.docx

1 型糖尿病药物疗效的流式细胞仪操作原理:体内各 T 淋巴细胞亚群相互作用维持着机体的正常免疫功能, 在保护机体免受各种病原体感染的过程中起着重要的作用。CD3 、CD4 、CD8 均为随 T细胞分化过程出现的抗原故又称 T细胞分化抗原。CD3 抗原分布于所有成熟的 T细胞膜上, 是所有的 T 细胞都具有的分化抗原, 也是鉴定外周血中 T 细胞的最好标志。 CD4 和CD8 亚群是一对相互排斥的分化抗原, 正常人 CD4+T 细胞约占 T 细胞总数的 65%, 可分为 Thl 和Th2 两个亚群。CD4+ 多为辅助性 T细胞(Th) ,通常是识别抗原递呈细胞表面与 MHC Ⅱ类分子结合的抗原, 具有辅助体液免疫和细胞免疫的功能。Thl 、Th2 细胞依赖它们产生的细胞因子还有相互调节和制约作用。CD8 分子多由抑制性T细胞(Ts) 和细胞毒性T细胞(CTL) 表达,是鉴定此两种细胞亚群的主要标志。 Ts 细胞在免疫应答中主要起抑制性调节作用, 通过抑制 Th 细胞的活性, 抑制抗体形成和细胞介导免疫应答的作用。 CTL 细胞具有细胞毒活性可以杀伤带有抗原的靶细胞。CD4/CD8 正常机体为 以上。一般认为 CD4+T 细胞减少,CD4/CD8 下降,意味着机体免疫功能低下。。本实验主要观察小鼠脾脏中的 Th1 、Th2 、Treg 、Th17 细胞。主要选取的抗体有: CD3 ,CD4 ,CD8 , Foxp3 +, RoR γt +, T-bet +等。流式细胞分析 T 细胞亚型处死各组小鼠,每组 3 只,取脾脏,遵照相关流式操作流程处理脾细胞。, 封闭液来自正常小鼠或大鼠血清( ),每组检测 8个不同的指标,分别设为空白对照管、 CD4 +管、 CD4 + CD25 +管、 Foxp3 +单标管、 Foxp3 + /CD4 + CD25 +管、 RoR γt + /CD4 +管、 T-bet + /CD4 +管和 GATA-3 + /CD4 +管(表 ) [6]。 Properties of antibodies used in flow cytometric analysis. Host Isotype Reactivity Conjugate Cat. No. Anti-CD4 Rat IgG2b, kappa Mouse APC-eFluor 780 47-0041-80 Anti-CD25 Rat IgG1, lambda Mouse PE 12-0251-81 Anti-Foxp3 Rat IgG2a, kappa Mouse Alexa Fluor 488 53-5773-80 Anti-RoR γt Rat IgG1, kappa Mouse PE 12-6981-80 Anti-T-bet Mouse IgG1, kappa Mouse PE 12-5825-80 Anti-GATA-3 Rat IgG2b, kappa Human, Mouse PerCP-eFluor 710 46-9966-41 All six antibodies were purchased from eBioscience. Serum and antibodies used for stai