CCK-8操作说明与检测步骤.doc

DOJINDO 操作说明细胞活性检测 96 孔板中接种细胞悬液(100 ml/孔)。将培养板放在培养箱预培养(在 37℃, 5% CO 2 的条件下)。 2. 向每孔加入 10 K- 8 溶液( 注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 值的读数)。 3. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 4. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 5. 如果暂时不测定 值,打算以后测定的话,可以向每孔中加入 10 ml M HCl 溶液或者 1% w/vSDS 溶液, 并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。细胞增殖- 毒性检测 96 孔板中配制 100 ml 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养 24 小时(在 37℃, 5% CO 2 的条件下)。 2. 向培养板加入 10 ml 不同浓度的待测物质。 3. 将培养板在培养箱孵育一段适当的时间( 例如: 6,12, 24或 48 小时)。 4. 向每孔加入 10 K-8 溶液( 注意不要在孔中生成气泡,它们会影响 值的读数)。 5. 将培养板在培养箱内孵育 1-4 小时。 6. 用酶标仪测定在 450 nm 处的吸光度。 7. 如果暂时不测定 值, 打算以后测定的话, 可以向每孔中加入 10 ml M HCl 溶液或者 1% w/vSDS 溶液, 并遮盖培养板避光保存在室温条件下。在 24 小时内吸光度不会发生变化。注意: 如果待测物质有氧化性或还原性的话, K-8 之前更换新鲜培养基, 去掉药物的影响。当然药物影响比较小的情况可以不更换培养基, 直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。制作标准曲线 1. 先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量,然后接种细胞。 2. 按比例( 例如: 1/2 比例) 依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度, 一般要做 3-5 个细胞浓度梯度,每组 3-6 个复孔。 3. 接种后培养 2-4 小时使细胞贴壁, K-8 试剂培养一定时间后测定 值, 制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴), 值为纵坐标(Y轴) 的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量( 使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致,便于确定细 K-8 后的培养时间)。 DOJINDO K-8 检测步骤 100 μl细胞悬液。 a) 37℃下预孵育培养板。 b) 3. 向各孔中加入各浓度的待测溶液 c)10 μl。 4. 37℃下孵育。 K-8 溶液 d)。 6. 37℃下孵育 1-4 小时。 e) 450 nm 处的 OD 值。 a)使用适当的培养基制备 50,000-100,000 个/ml 的细胞悬液。 b)建议使用 CO2 培养箱过夜预培养。 c) 使用培养基或 PBS 来制备溶液。 d) 如果待测溶液有还原性,测定不含细胞,K-8 的待测溶液在 450 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小,K-8 ,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基, 并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的 100 μl 培养基和 K-8 进行检测。 e)白细胞可能需要培养较长时间。活力计算细胞活力*(%) =[A( 加药)-A (空白) ]/[A (