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光学显微镜的历史及基础知识光学显微镜 optical microscope 利用光学原理把人眼所不能分辨的微小物体放大成像, 以供人们提取微细结构信息的光学仪器。简史早在公元前 1 世纪, 人们就已发现通过球形透明物体去观察微小物体时可以使其放大成像。后来逐渐对球形玻璃表面能使物体放大成像的规律有了认识。 1590 年, 荷兰和意大利的眼镜制造者已经造出类似显微镜的放大仪器。 1610 年前后, 意大利的伽利略和德国的 J. 开普勒在研究望远镜的同时,改变物镜和目镜之间的距离,得出合理的显微镜光路结构,当时的光学工匠遂纷纷从事显微镜的制造、推广和改进。 17 世纪中叶, 英国的 R. 胡克和荷兰的 列文胡克都对显微镜的发展作出了卓越的贡献。 1665 年前后, 胡克在显微镜中加入粗动和微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台。这些部件经过不断改进, 成为现代显微镜的基本组成部分。 1673 ~ 1677 年期间,列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜,其中9 台保存至今。胡克和列文胡克利用自制的显微镜在动、植物机体微观结构的研究方面取得了杰出的成就。 19 世纪, 高质量消色差浸液物镜的出现使显微镜观察微细结构的能力大为提高。 1827 年 . 阿米奇第一个采用浸液物镜。 19 世纪 70 年代,德国人 E. 阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。这些都促进了显微镜制造和显微观察技术的迅速发展,并为 19 世纪后半叶包括 R. 科赫、 L. 巴斯德等在内的生物学家和医学家发现细菌和微生物提供了有力的工具。在显微镜本身结构发展的同时, 显微观察技术也在不断创新: 1850 年出现了偏光显微术, 1893 年出现了干涉显微术, 1935 年荷兰物理学家 F. 泽尔尼克创造了相衬显微术, 他为此在 1953 年被授予诺贝尔物理学奖金。古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组合, 它以人眼作为接收器来观察放大的像。后来在显微镜中加入了摄影装置, 以感光胶片作为可以记录和存储的接收器。现代又普遍采用光电元件、电视摄象管和电荷耦合器等作为显微镜的接收器, 配以微型电子计算机后构成完整的图象信息采集和处理系统。工作原理表面为曲面的玻璃或其他透明材料制成的光学透镜可以使物体放大成像。光学显微镜就是利用这一原理把微小物体放大到人眼足以观察的尺寸。近代的光学显微镜通常采用两级放大, 分别由物镜和目镜完成。被观察物体 AB 位于物镜的前方, 被物镜作第一级放大后成一倒立的实象 A1B1 。然后此实像再被目镜作第二级放大, 成一虚象 A2B2, 人眼看到的就是虚像 A2B2 。显微镜的总放大倍率为显微镜总放大倍率=物镜放大倍率× 目镜放大倍率放大倍率是指直线尺寸的放大比而不是面积比。在用人眼直接观察的显微镜中, 可以在实像面 A1B1 处放置一块薄型平板玻璃片,其上刻有某种图案的线条,例如十字线。当实像 A1B1 和这些刻线叠合在一起时, 利用这些刻线就能对物体进行瞄准定位或尺寸测量。这种放置在实像面处的薄型平板玻璃片通称分划板。在新型的以光电元件作为接收器的光学显微镜中,电视摄象管的靶面或其他光电元件的接收面就设置在实像面上。组成光学显微镜由载物台、聚光照明系统、物镜、目镜和调焦机构组成。载物台用于承放被观察的物体。利用调焦旋钮可以驱动调焦机构使载物台作粗调和微调的升降运动, 使被观察物体调焦清晰成象。它的上层可以在水平面内沿、方向作精密移动和在水平面内转动, 把被观察的部位调放到视场中心。聚光照明系统由灯源和聚光镜构成。当被观察物体本身不发光时,由外界光源给以照明。照明灯的光谱特性必须与显微镜的接收器的工作波段相适应。聚光镜的功能是使更多的光能集中到被观察的部位。物镜位于被观察物体附近实现第一级放大的镜头。在物镜转换器上同时装着几个不同放大倍率的物镜。转动转换器可让不同倍率的物镜进入工作光路。物镜放大倍率通常为 5~ 100 倍。物方视场直径(即通过显微镜能看到的图像范围)约为 11-20 毫米。物镜放大倍率越高则视场越小。物镜是显微镜中对成象质量优劣起决定性作用的光学元件。常用的有:①能对两种颜色的光线校正色差的消色差物镜;②质量更高的能对三种色光校正色差的复消色差物镜;③能保证物镜的整个像面为平面以提高视场边缘成像质量的平像场物镜。为了提高显微观察的分辨率, 在高倍物镜中采用浸液物镜,即在物镜的下表面和标本片的上表面之间填充折射率为 左右的液体。目镜位于人眼附近实现第二级放大的镜头。目镜放大倍率通常为 5~ 20 倍,按能否放置分划板, 可分成两类: ①不宜放置分划板的,如惠更斯型目镜。这是现代显微镜中常用的型式,优点是结构简单、价格低廉;缺点是由于成像质量的原因,不宜放置供瞄准定位或尺寸测量用的分划板。②能放