光学显微镜的构造和使用.doc

光学显微镜的构造和使用一、目的要求 1. 掌握普通光学显微镜的基本构造、使用方法、保护要点。 2. 掌握普通光学显微镜油浸系的原理。 3. 使用油镜观察几种细菌的基本形态。二、显微镜的基本构造显微镜由机械装置和光学系统两大部分组成(图 1-1 )。光学显微镜的构造(图 1-1) 1. 物镜转换器 2. 接物镜 3. 游标卡尺 4. 载物台 5. 聚光器 7. 光源 8. 镜座 9. 电源开关 10. 光源滑动变阻器 11. 粗调螺旋 12. 微调螺旋 13. 镜臂 14. 镜筒 15. 目镜 16. 标本移动螺旋 1 .机械装置镜座( base )和镜臂( arm )镜座位于显微镜底部,呈马蹄形,它支持全镜。镜臂有固定式和活动式两种, 活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。镜筒( body tube )是由金属制成的圆筒,上接目镜,下接转换器。镜筒有单筒和双筒两种, 单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式的, 倾斜式镜筒倾斜 45°。双筒中的一个目镜有屈光度调节装置,以备在两眼视力不同的情况下调节使用。转换器( no sepiece )为两个金属碟所合成的一个转盘,其上装 3—4 个物镜,可使每个物镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统。载物台( stage )又称镜台,为方形或圆形的盘,用以载放被检物体, 中心有一个通光孔。在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹, 用以固定标本; 有的装有标本推动器, 将标本固定后, 能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度,能确定标本的位置,便于找到变换的视野。调焦装置是调节物镜和标本间距离的机件,有粗动螺旋( coarse adjustment )即粗调节器和微动螺旋( fine adjustment )即细调节器, 利用它们使镜筒或镜台上下移动, 当物体在物镜和目镜焦点上时, 则得到清晰的图像。 2 .光学系统物镜( objective )物镜安装在镜筒下端的转换器上,因接近被观察的物体, 故又称接物镜。其作用是将物体作第一次放大, 是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如: NA0 . 30; 10×; 160/0 . 17; 16mm 。其中“ NA0 . 30”表示数值孔径( numerical aperture , 简写为 NA ),“ 10×”表示放大倍数,“ 160/0 . 17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度( mm ), 16mm 表示焦距。目镜( ocular lens )装于镜筒上端,由两块透镜组成。镜把物镜造成的像再次放大,不增加分辨力,上面一般标有 7×、 10×、 15× 等放大倍数, 可根据需要选用。一般可按与物镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500 — 700 倍,最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的放大倍数过大,反而影响观察效果。聚光器( condenser ) 光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本, 增强照明度和造成适宜的光锥角度, 提高物镜的分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈( iris diaphragm )组成,聚光镜由透镜组成,其数值孔径可大于1 ,当使用大于 1 的聚光镜时,需在聚光镜和载玻片之间加香柏油,否则只能达到 。虹彩光圈由簿金属片组成, 中心形成圆孔, 推动把手可随意调整透进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小, 可得到适当的光照和清晰的图像。光源( light source )较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内, 通过按钮开关来控制; 老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜, 反光镜是一个两面镜子, 一面是平面, 另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时,用平面反光镜;使用油镜或光线弱时可用凹面反光镜。滤光片( filter )可见光是各种颜色的光组成的,不同颜色的光线波长不同。如只需某一波长的光线时,就要用滤光片。选用适当的滤光片,可以提高分辨力, 增加影像的反差和清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的, 分别透过不同波长的可见光, 可根据标本本身的颜色,在聚光器下加相应的滤光片。三、油镜物镜的基本原理微生物学研究用的显微镜的物镜通常有低倍物镜( 16mm , 10×)、高倍物镜( 4mm , 40— 45× )和油镜( mm , 95— 100 × )三种。油镜通常标有黑圈或红圈,也有的以“ OI( oil immer-sion )字样表示,它是三者中放大倍数最大的。根据使用不同放大倍数的目镜, 可使被检物体放大 1000 —2 000 多倍。从图Ⅲ-3 中可看出油镜的焦距和工作距离(标本在焦点上看得最清晰时,物镜与样品之间的距离)最短,光圈则开得最大,因此,在使用油镜观察时,镜头离标本十