低氧对大鼠睾丸部分生化指标影响.doc

1 低氧对大鼠睾丸部分生化指标影响作者:廖卫公,高钰琪,蔡明春,蒋春华,吴艺,陈建【摘要】目的通过研究低氧对大鼠睾丸中部分生化指标的影响,探讨低氧对精子发生局部环境的影响。方法将成年雄性 Wistar 大鼠随机分为 4组: 常氧对照组、低氧 5?d 组、低氧 15?d 组和低氧 30?d 组。低氧各组置低氧舱内模拟 5?000?m 高原减压。采用生化法测定各组大鼠睾丸组织中乳酸脱氢酶同工酶 C4 与乳酸脱氢酶的比值( LDH-C4/LDH ) 和γ- 谷氨酰***转移酶( GGT ) 活性, 以及果糖、丙二醛含量。结果低氧 30? d 组大鼠睾丸组织 LDH-C4/LD H 显著低于常氧对照组( P0 杄 05) ;低氧 30?d 组 GGT 活性显著高于常氧对照组( P0 杄 05) 。低氧各组睾丸组织果糖含量与常氧对照组比较差异无统计学意义( P0 杄 05) 。低氧各组大鼠睾丸组织丙二醛含量均显著低于常氧对照组( P0 杄 05)。结论低氧引起精子发生的环境改变,提示低氧影响精子的发生。【关键词】低氧; γ- 谷氨酰***转移酶;果糖;精子精子的发生是一个复杂的生理过程。睾丸组织内局部 2 环境的恒定, 对保障精子发生的正常进行十分重要。局部环境的恒定有赖于睾丸组织中某些生化成分的维持。以往研究发现, 其他因素引起的精子发生异常, 往往伴随着睾丸组织中某些生化成分的异常〔 1,2〕。高原低氧对精子发生有抑制作用〔 3,4〕。为了解高原低氧对精子发生的抑制是否与睾丸组织局部微环境的代谢改变有关, 我们通过观测低氧对睾丸组织内乳酸脱氢酶同工酶 C4/ 乳酸脱氢酶( LDH-C4/LDH )、γ- 谷氨酰***转移酶( GGT )活性和果糖、丙二醛( MDA ) 含量的影响, 来了解低氧对精子发生局部环境的影响。 1 材料与方法 1杄1 材料 1杄1杄1 实验动物选用 180 ~ 220?g Wista r 大鼠( 本校附属第三医院动物所)。将 30 只大鼠随机分为常氧组( n=8 )、低氧 5?d 组( n=8 )、低氧 15?d 组( n=6 )和低氧 30?d 组( n=8 ) 。低氧的 3 个组置低压舱中喂养,每天开舱 40?min 打扫卫生、更换食物。常氧组置低压舱外喂养。各组每天光照 12?h 。 3 1杄1杄2 主要试剂***酸、十二烷基磺酸钠( SDS ,上海生工公司); 2- ***基己酸、还原型烟酰***腺瞟呤二核苷酸(NADH) (美国 Sigma-Aldrich 公司); D- 果糖、间苯二酚、硫代巴比妥酸、双甘氨酸( 上海化学试剂公司);γ-glutamyl-p-nitromilide (上海生物化学研究所)。 1杄2 方法 1杄2杄1 睾丸组织匀浆液的提取大鼠活杀后,取右侧睾丸,按 1∶ 10(W/V) 比例加入 0 杄1 ?mol/L 磷酸缓冲液( pH?7 杄4), 用玻璃匀浆器匀浆。 4? ℃ 8?000?r/min 离心 10?min ,取上清备用。 1杄2杄2 睾丸组织 LDH - C4/LDH 测定〔 5〕(1)LDH 总活性测定 1杄 0?mmol/L ***酸 0杄 5?ml ,加入0杄 23?mmol/L NADH 0杄 5?ml 溶液,在 37? ℃孵浴 5?min , 加入 15 倍稀释(预实验确定)的睾丸组织匀浆液 20? μl,在 4 340?nm 下记录 3?min 吸光度的变化值。(2)LDH-C4 活性测定 10杄 0?mmol/L2- ***基己酸 0杄 5?ml 和0杄 23?mmol/L NAD H 溶液 0杄 5?ml ,在 37? ℃水浴 5?min , 加入 5 倍稀释( 预实验确定) 的睾丸组织匀浆液 20? μl,在 340?nm 下记录 3?min 吸光度的变化值。③计算 LDH-C4 与 LDH 的比值比值= LDH-C4 引起的吸光度变化值/ LDH 总活性吸光度的变化值。 1杄2杄3 睾丸组织γ- 谷氨酰***转移酶活性测定〔 6〕取睾丸组织匀浆液 100? μl ,加入 0杄 5?ml GGT 反应底物(0杄 107?g γ-glutamyl-p-nitromilide ,0杄 539?g 双胱氨酸,0 杄 224?g MgCl2 · 6H2O 溶于 100?ml 185?mmol/L pH?8 杄 25 Tris-HCl 中)。 37? ℃孵育 10?min , 加入 0杄 5?ml 25% ( W/V ) 三***乙酸。室温 4?000?r/min 离心 10?min ,上清在 405?n m 下比色。以每分钟转化 1?μ mol 底物的酶量为一个单位。用 Follin- 酚法定量睾丸组织匀浆液中总蛋白质, 酶活性以 U/m g 睾丸匀浆液总蛋白表示。 1杄2杄4 睾丸果糖