体内乌头类生物碱毒物检测方法概述.doc

1 体内乌头类生物碱毒物检测方法概述【摘要】概述了利用薄层层析法、紫外分光光度法、高效液相色谱法、高效液相-质谱联用、多级质谱等方法检测体内乌头类生物碱毒物的方法, 旨在为临床诊断和鉴定提供有益的借鉴。【关键词】乌头; 生物碱; 毒物检测; 高效液相色谱法乌头类生物碱是一类化学结构复杂和生物活性较强的中药成分,绝大部分存在于乌头属( Aconitum )和翠雀属( Delphinium )植物中。乌头属植物在我国有 170 余种,资源十分丰富, 其中有的为常用中药材, 如川乌、草乌、附子等, 可用于镇痛、麻醉、消炎和治疗风湿等疾病, 功效显著[1]。乌头类生物碱被认为是这些药材的特征生物活性成分,但大多数乌头属药材都含有大量的有毒双酯型***[2] 。常见的这类双酯型生物碱的结构见图 1 ,其中***为此类药材中广泛存在且含量较高的一种。 2 由于炮制、误服或投毒等原因而引起***中毒的情况很多, 口服*** mg 即可引起中毒, 致死量为2~5 mg [3], 治疗量与中毒量或致死量接近[ 4] 。仅 1980 年以来在国内报道的怀疑是***中毒的案例达数万宗, 并有大量中毒案例未予报道[5]。这些案例涉及中毒的临床鉴定, 鉴定的目的是判定其摄入量是否超出治疗量范围, 而这个过程的关键是要准确地检测出体内乌头类生物碱的残留量。由于***在体内分解代谢迅速( 半衰期 t1/2 为2 min) , 而且***中毒亦无特异性临床表现,中毒剂量也因个体差异有很大的不同, 临床诊断往往缺少科学依据。近年来由于科技的进步, 为体内***毒物的检测提供了新方法和新技术。本文概述了检测体内乌头类生物碱毒物的方法, 为临床诊断和鉴定提供有益的借鉴。 1 传统方法 20 世纪 80 年代以前对乌头类生物碱的检测方法,已报道的有浸渍纸色谱法[6]、气相色谱法[7]、薄层扫描法[8]、微量结晶法[9]、薄层层析法[9]、比色法[9]、紫外分光光度法[9] 和红外光谱法[9]等, 这些方法或者分离不完全, 测量误差大, 或者灵敏度不高, 操作繁琐, 或者样品需 3 要量大,预处理繁琐。 1985 年, 王月娥等[ 10] 就利用放射性标记法、药代动力学模型和纸层析分析法详细研究过 3- 乙酰***在小鼠体内的代谢过程, 并获得了几个结果。①血药浓度: 利用动力学模型算出了该化合物在体内的药代动力学参数。②组织含量:在注射 5 min 后胆囊中 3- 乙酰***含量最高,之后依次是肝、肾、肺和脾,心脏和脑最低; 3h 后胆囊中含量明显升高,约为 5 min 时含量的 倍; 24h 后胆囊含量明显降低,而其它组织中含量降低不明显。给药 5d 后各组织中仍有一定量,直至 7d 后脏器中含量才接近衡量。③排泄浓度: 对小鼠给药 30 min 后尿内已有生物碱排出, 12h和 24h 后尿内生物碱排出量分别为( 22±5 )%和( 27±4 )% , 3- 乙酰***原型排出量分别为( ± )%和( ± 10) %。④与血浆蛋白的结合: 结果表明 3- 乙酰***与血浆蛋白的结合率为( ± )%。⑤代谢: 3- 乙酰***进入体内后发生代谢分解, 以多种形式存在,有 3- 乙酰***原型物、***和其它乌头类生物碱, 表明其进入体内后并非立即发生全部 3 位脱乙酰基转化为***。以上结论虽然仅针对 3- 乙酰***的代谢, 但提供了研究乌头生物碱在体内代谢过程和定性分析毒物种类, 以及从体内代谢物中分析中毒原因提供了重要思路。但该方法繁琐费时, 灵敏度不高而难 4 于推广。李绪文等[ 11 ]从已灌服*** 3h 后的家兔胆汁中提取出代谢物,在薄层色谱( TLC )上快速地展开用碘化铋钾溶液显色, 进行了初步快速研究。实验表明:①采用的乌头总碱的提取方法以及 TLC 检识条件均可用于***在动物体内代谢产物的研究, 可为因服用***类药物而导致中毒的法医学快速鉴定提供依据和方法。②给药 3h 后,***在兔体内的代谢产物大量集中在肝脏而不是胆汁中, 因此毒物的检测应重点在肝脏。 2 高效液相色谱法( HPLC ) 高效液相色谱法是20世纪60 年代末迅速发展起来的一种新型分离分析技术, 分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高,对药物动力学和临床药学研究的重要性越来越突出。王慕邹等[ 12 ]在 1983 年就较早地利用 HPLC 测定了 10 种乌头植物中的***、中乌碱和次乌碱的含量。发现虽然乌头类生物碱的最大吸收为 230 nm 左右,但在该波长杂质干扰大,而在 240 nm 检测基线更稳定,可分析各种乌头中的生物碱含量,为检测乌头类生物碱提供了可行的方法。 5 张兴华等[ 13] 初步探索应用 HP