体外培养的人AGM区基质细胞表达多种造血生长因子.doc

1 体外培养的人 AGM 区基质细胞表达多种造血生长因子论文联盟 。作者: 陈惠芹, 张绪超, 唐新意 2 ,吴北燕,黄绍良【摘要】本研究检测人胚胎主动脉-性腺-中肾( AGM ) 区基质细胞表达的造血生长因子,为探讨 AGM 区基质细胞在胚胎造血发生中的作用及其造血支持作用提供基础资料。采用 RT-PCR 方法在 mRNA 水平分析 IL-6 、 SCF 、 Flt3-L 、 OSM 、 IL-3 、 TPO 、 M-CSF 、 LIF 等因子在人 AGM 区基质细胞( hAGMS1-S5 )的表达情况, 应用 ELISA 法测定 IL-6 、 SCF 、 Flt3-L 在 hAGMS1-S5 细胞培养上清液中的分泌水平, 并将脐血 CD34 +细胞与 hAGMS1-S5 饲养层细胞共培养 14 天后行造血细胞集落培养以进一步检测人 AGM 区基质细胞的造血支持作用。结果表明: hAGMS1-S5 均表达 IL-6 、 SCF 、 Flt3-L 、 OSM 等造血生长因子 mRNA ,不表达 IL-3 、 TPO 、 M-CSF 、 LIF 等因子 mRNA 。在 hAGMS1-S5 细胞培养上清液中可测得分泌的 SCF 、 Flt3-L 、 IL-6 等因子, hAGMS1-S 5 组间比较各因子水平无显著性差异( ) 。集落培养结果表明, hAGMS1-S5 对 CFU-GM 、 BFU-E 、 CFU-Mix 均有不 2 同程度的扩增作用, hAGMS1-S5 的造血支持作用组间比较亦显示有显著性差异( ), 其中 hAGMS3 、 S4 优于 S1 、 S2及 S5 。结论:人 AGM 区基质细胞表达 SCF 、 Flt3-L 、 IL-6 、 OSM 等多种造血生长因子, 这可能与 AGM 区基质细胞支持造血细胞原始发生和体外维持造血干细胞功能相关。【关键词】主动脉-性腺-中肾区; 基质细胞; 造血生长因子 Hematopoietic Growth Factors Expressed in Human Aorta-Gonad- Mesonephros (AGM)-Derived Stromal Cells in vitro AbstractThis study was aimed to investigate the hematopoietic growth factors expressed in human aorta-gonad-mesonephros (AGM)-derived stromal cells in vitro in order to provide the basic data for elucidating the role of AGM -derived-stromal cells in embryo-hematopoiesis and its hematopoietic suppoitive effect. RT-PCR was used to analyze the expression of IL-6, SCF, Flt3-L, oncostatin M(OSM), IL-3, TPO, M-CSF and LIF in human aorta-gonad- 3 mesonephros-derived stromal cells (hAGMS1-S5) at mRNA level. IL-6, SCF and Flt3-L levels were detected in the supernatant of hAGMS1-S5 stromal cells by ELISA assay. Umbilical cord blood CD34 + cells were cocultured with hAGMS1-S5 feeder cells , and hematopoietic cells were collected at day 14 for colony analysis in methylcellulose semisolid medium. The results showed that human aorta-gonad-mesonephros-derived stromal cells S1-S5 expressed IL-6, SCF, Flt3-L and OSM mRNA, but did not express IL-3, TPO, M-CSF and LIF mRNA. In the supernatant of hAGMS1-S5 cells, IL-6, SCF and Flt3-L could be detected by ELI