养血定颤方对帕金森病大鼠行为学、多巴胺能神经元和自由基损伤的影响.doc

1 养血定颤方对帕金森病大鼠行为学、多巴***能神经元和自由基损伤的影响【摘要】目的: 探讨养血定颤方治疗帕金森病的作用及机制。方法:采用 6拟羟基多巴***单点注射法制备帕金森病大鼠模型, 考察养血定颤方对模型大鼠平均转速、 TH 阳性细胞数和自由基损伤的影响。结果: 养血定颤方能显著降低平均转速,增加黑质 TH 阳性细胞,降低 MDA 水平,提高 SOD 、 GSH 水平。结论: 养血定颤方能改善帕金森病大鼠旋转行为,保护受损神经元,其机制与减少自由基损伤有关。【关键词】帕金森病行为学多巴***能神经元自由基损伤养血定颤方帕金森病是一种常见的中枢神经系统变性性疾病,其病理特征是中脑黑质致密部多巴***能神经元变性缺失。多巴替代疗法虽能改善临床症状, 但长期应用会出现“开—关”现象、运动及精神障碍等副作用, 且仍无法延缓多巴***能神经元进行性缺失[ 1] ,因此寻求新的有效治疗手段具有重要意义。养血定颤方系导师张伯礼教授所创新方, 治疗帕金森病有较 2 好疗效, 本研究旨在观察该方对帕金森病大鼠行为学、受损神经元和自由基损伤的影响,为临床进一步应用提供科学依据。 1 材料与方法 材料实验动物 Wista r 雄性大鼠,体重 280 ~ 320 g, 北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证编号 SCXK( 京)2002 拟 2003 。药物: 6拟羟基多巴***、阿朴吗啡、 anti 拟 TH(Sigma 公司) ,美多芭( 上海罗氏制药有限公司),养血定颤方( 自制), MDA 、 SOD 、 GSH 试剂盒( 南京建成生物工程研究所) 。仪器:江湾 II 型立体定位仪( 第二军医大学), 微量进样器( 安亭微量进样器厂), 病理图文分析系统( 千屏影像工程公司)。 方法模型药物配制:以 0. 01%VC 溶液配制 3 μ g/μL6拟羟基多巴***,避光冷藏;模型制备 Wistar 大鼠 45 只,禁食 12h ,麻醉,消毒,开皮,暴露前囟,固定大鼠, 依据大鼠脑立体定位图谱[2], 确定坐标(1. 0 mm , -2. 7 mm, -5. 2 mm) 与(1. 0 mm , -2. 7 mm,-6. 0 mm) , 打孔, 每点注射 5 μL 造模药物,留针 10 min ,退针,缝合。另取大鼠 15只, 同法操作,注射等体积 0. 01%VC 溶液。模型筛选:术后 3 3 周,腹腔注射阿朴吗啡 mg/kg 诱导旋转, 40 min 平均转速> 7转/min 为模型成功大鼠。分组与给药:取模型成功大鼠, 随机分为 3 组,即养血定颤方组、美多芭组和模型组,注射 VC 溶液大鼠为正常组。4 组分别灌胃给予养血定颤方(相当于生药 16. 4 g/kg · d) 、美多芭(125 mg/kg · d) 和生理盐水(正常组和模型组, 3 mL/d) ,连续 4 周。平均转速:第7 周注射阿朴吗啡诱导旋转,记录 40 min 平均转速。 TH 免疫组化: 第8 周每组取 6 只大鼠,麻醉,以 4% 多聚甲醛溶液灌注固定大鼠, 取脑, 石蜡埋块, 切片。常规 SABC 免疫组化染色(anti 拟 TH 稀释比 1∶ 100) 。摄片。黑质毁损侧 TH 阳性细胞计数。自由基损伤:第8 周每组取 6 只大鼠, 断头, 冰上分离黑质, 称重, 以冷生理盐水制成匀